产品简介
Bio-FIREFLYGLO萤光素酶报告基因检测系统是一种辉光型定量检测试剂盒，具有高灵敏度和发光信号稳定的特点，可以满足高通量检测萤光素酶在哺乳动物细胞中的表达。相比于美仑辉光型Firefly-Glo萤光素酶报告基因检测试剂盒（MA0519），本品发光信号强度大幅度提升，有效提高了检测灵敏度，可以用于检测ADCC Reporter Bioassay或细胞中萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)报告基因的表达。
反应原理如下：
产品优势
1、本产品操作便捷，读数稳定，检测速度快：本产品集细胞裂解、萤火虫萤光素酶检测于一体，只需要加样-读板，即可完成实验。产生的光信号半衰期近乎1h，发光信号稳定。
2、使用灵活便捷，适用范围广：本产品发光信号稳定，既适用于少量样品的检测，也适用于大量样品的高通量筛选。
3、兼容性强：本产品兼容各种常见培养液，正常培养液中的酚红、10%以内的胎牛血清或小牛血清、2%以内的DMSO或乙醇对信号和稳定性基本没有影响，常用的盐类或金属离子在正常浓度下也基本没有影响。
萤火虫萤光素酶报告基因产品对比
美仑的三款一步法萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒的主要特点和差异如下。
如果对发光信号要求很高，并在30分钟内即可进行检测，推荐使用Bright-FIREFLYGLO；如果对发光信号有一定要求，并在30分钟到1小时即可进行检测，推荐使用Bio-FIREFLYGLO。如果对发光信号和稳定性都有要求，需要批量或连续操作，推荐使用Firefly-Glo。
保存条件
全新试剂盒-20℃保存，自生产之日起12个月有效；
溶解分装后的Bio-FIREFLYGLO Luciferase Substrate于-70℃避光保存一年，或-20℃短期保存不超过一个月。
运输条件
干冰运输。
注意事项
- 检测仪器选择：能够检测化学发光的仪器都适用本试剂盒的检测，但是针对相同的样品，不同检测器本底信号值和测量值均可能不同；且对于同一样本检测，不同仪器的数值不可横向比较。为防止孔间干扰，推荐使用不透明白色或黑色细胞培养板。
- 由于发光信号会受到检测环境如培养基组分、温度等影响，所以应确保同组内不同样本检测条件一致。
- 酶促反应对温度较为敏感，加样检测前务必将检测试剂以及细胞培养板平衡至室温。
- 为保证萤光素酶检测试剂稳定性，适量分装后建议-70℃长期避光保存或者短期存放于-20℃不超过一周，并尽快使用，尽量避免多次反复冻融。
- 如需同时检测多个细胞培养板，请尽量确保每个细胞板加入检测溶液后孵育时间一致，再进行数据读取，以此获得最佳的检测结果。
- 萤火虫萤光素酶催化的生物发光的最强波长为560 nm。
数据展示
（1）Firefly萤光素酶发光稳定性及线性检测
方法：分别将293T细胞和CHO-K1细胞表达的Firefly萤光素酶稀释不同倍数，检测美仑及竞品V品牌Firefly试剂盒纯酶水平发光稳定性及线性拟合情况。
结论：本公司开发产品的发光强度略高于竞品；产品检测半衰期与对照相近；本产品单一时刻光强-Firefly萤光素酶浓度标曲线性良好（R2=0.999）。不同种类细胞表达的酶发光强度与稳定性存在差异。
图1. 293T细胞表达的Firefly萤光素酶发光稳定性及线性检测
图2. CHO-K1细胞表达的Firefly萤光素酶发光稳定性及线性检测
（2）细胞内Firefly萤光素酶发光稳定性及线性检测
方法：细胞培养体系下验证光强稳定性及细胞密度-光强标曲。将Firefly萤光素酶载体瞬时转入293T细胞或CHO-K1细胞，24h后分别使用产品检测细胞水平发光稳定性（20000个细胞/孔）及线性拟合情况。
结论：本公司开发产品的发光强度略高于竞品；产品检测半衰期与对照相近，约1h；本产品单一时刻光强-Firefly萤光素酶浓度标曲线性良好（R2=0.999）。不同种类的细胞亮度与稳定性存在差异。
图3. 293T细胞内Firefly萤光素酶发光稳定性及线性检测
图4. CHO-K1细胞内Firefly萤光素酶发光稳定性及线性检测
（3）在哺乳动物细胞多种培养基中检测Firefly萤光素酶发光信号
方法：将Firefly萤光素酶稀释在多种培养基中，与Firefly Luciferase检测工作液1：1混合后，检测发光信号。用DMEM培养基进行数据归一化。
结论：本Firefly萤光素酶报告基因体系兼容多种培养基。
图5. 在不同培养基中发光检测情况
（4）本公司同类产品效果比较
方法：使用表达Firefly萤光素酶的293T细胞，检测美仑同系列产品亮度与发光稳定性。
图6. 本公司同类产品比较
（5）ADCC效应检测
方法：使用PWL110进行CD20抗体的ADCC效应检测。靶细胞为Raji，效应细胞为Jurkat-luc2p-NFAT-RE- FcγRIIIa-high affinity(V158)（美仑货号：PWL201），效靶细胞比例为3：1。将上述抗体和细胞混合液与Firefly Luciferase检测工作液1：1混合后，检测发光信号。
图7. ADCC效应检测
（6）ADCP效应检测
方法：使用PWL110进行CD20抗体的ADCP效应检测。效靶细胞比例为1:1，靶细胞为Raji，效应细胞为ADCP Bioassay Effector Cell FcγRIIa(H variant) -NFAT Jurkat。
图8. ADCP效应检测
关键词
辉光型萤火虫萤光素酶, Luciferase (Firefly), Firefly Luciferase, Firefly萤光素酶