产品简介
本产品是一种高灵敏度、稳定、均质的双报告基因检测试剂盒。本试剂盒中含有高纯度的萤火虫萤光素(Firefly Luciferin)和腔肠素(Coelenterazine)，萤火虫（Firefly）萤光素酶和海肾（Renilla）萤光素酶的活性可在单个样品中依次检测。先以萤光素(Luciferin)为底物检测萤火虫萤光素酶(Firefly Luciferase)，后加入淬灭萤火虫萤光素酶催化Luciferin发光的物质，同时以腔肠素(Coelenterazine)为底物来检测海肾萤光素酶(Renilla Luciferase)实现双萤光素酶报告基因检测。
将Dual-FIREFLYGLO Luciferase检测试剂混合萤光素底物后直接加入细胞，使细胞裂解，产生的光信号半衰期近乎2h。此后加入混有海肾萤光素酶底物的Stop&RENILLALIGHT Reaction Buffer检测试剂终止萤火虫萤光素酶反应的发光，检测海肾萤光素酶的光信号。海肾萤光素酶通常作为内参校正细胞数量及转染效率的差异，以通过减少外部影响来获得更可靠的实验数据。本试剂盒操作简便，灵敏度高，发光信号稳定，适合进行高通量检测。
反应原理如下：
产品优势
1、本产品操作便捷，读数稳定，检测速度快：本产品比其它双萤光素酶测定方法更加简单快捷，细胞可以在同一块多孔板中培养和检测，无需洗涤细胞，无需更换或去除培养液，也无需预先裂解和收集细胞样品，只需要加样-读板，即可完成实验。产生的光信号半衰期近乎2h，发光信号稳定。
2、使用灵活便捷，适用范围广：本产品发光信号稳定，既适用于少量样品的检测，也适用于大量样品的高通量筛选。
3、海肾萤光素酶检测工作液的淬灭效果好：海肾萤光素酶检测试剂可以抑制99.9%以上的萤火虫萤光素酶催化的发光信号，使得海肾萤光素酶活性检测结果更加准确。
4、兼容性强：本产品兼容各种常见培养液，正常培养液中的酚红、10%以内的胎牛血清或小牛血清、2%以内的DMSO或乙醇对信号和稳定性基本没有影响，常用的盐类或金属离子在正常浓度下也基本没有影响。
双萤光素酶报告基因产品对比
美仑的两款双萤光素酶报告基因检测试剂盒的主要特点和差异如下。
如果对发光信号要求很高，推荐使用双萤光素酶报告基因检测试剂盒（MA0518）；如果对发光信号和稳定性都有要求，需要批量或连续操作，推荐使用Firefly&Renilla-Light双萤光素酶报告基因检测试剂盒（MA0520）。对于常规的实验室检测，优先推荐使用Firefly&Renilla-Light双萤光素酶报告基因检测试剂盒（MA0520）。
保存条件
未开封试剂盒-20℃保存，自生产之日起12个月有效；
溶解分装后的Dual-FIREFLYGLO Luciferase检测试剂于-80℃以下避光保存6个月，或-20℃短期保存不超过一个月。
运输条件
干冰运输。
注意事项
- 检测仪器选择：能够检测化学发光的仪器都适用本试剂盒的检测，但是针对相同的样品，不同检测器本底信号值和测量值均可能不同；且对于同一样本检测，不同仪器的数值不可横向比较。为防止孔间干扰，推荐使用不透明白色或黑色细胞培养板。
- 由于发光信号会受到检测环境如培养基组分、温度等影响，所以应确保同组内不同样本检测条件一致。
- 酶促反应对温度较为敏感，加样检测前务必将检测试剂以及细胞培养板平衡至室温。
- 为取得最佳淬灭以及发光结果，加入Stop&RENILLALIGHT Reaction Buffer后，需要孵育至少10min才可以检测Renilla Luciferase活性。
- 如需同时检测多个细胞培养板，请尽量确保每个细胞板加入检测溶液后孵育时间一致，再进行数据读取，以此获得最佳的检测结果。
- Stop&RENILLALIGHT Substrate(100×)配制在无水乙醇中。由于无水乙醇容易挥发，有时会在初次使用时发现体积明显小于包装规格的情况，此时用无水乙醇把体积补足至包装规格，并混匀后即可使用。
- 萤火虫萤光素酶催化的生物发光的最强波长为560nm，海肾萤光素酶催化的生物发光的最强波长为480 nm。
数据展示
（1）Firefly与Renilla萤光素酶发光稳定性及线性检测
方法：分别将293T细胞和CHO-K1细胞表达的Firefly&Renilla萤光素酶稀释不同倍数，检测双报告基因试剂盒纯酶水平发光稳定性及线性拟合情况。
结论：
（1）产品检测稳定性良好，半衰期近乎2h。
（2）单一时刻光强-Firefly及Renilla萤光素酶浓度标曲线性良好（R2=0.999）。
图1. Firefly&Renilla萤光素酶发光稳定性及线性检测
（2）细胞内Firefly与Renilla萤光素酶发光稳定性及线性检测
方法：细胞培养体系下验证光强稳定性及细胞密度-光强标曲。将Firefly&Renilla萤光素酶载体共转染入293T细胞和CHO-K1细胞中，24h后分别使用产品检测细胞水平发光稳定性（10000个细胞/孔）及线性拟合情况。
结论：
（1）产品检测稳定性良好，半衰期近乎2h。
（2）单一时刻细胞内光强-Firefly及Renilla萤光素酶浓度标曲线性良好（R2=0.999）。
图2. 细胞内Firefly&Renilla萤光素酶发光稳定性及线性检测
（3）本公司产品与竞品发光强度对比情况
方法：将CHO-K1细胞表达的Firefly及Renilla萤光素酶，分别用竞品及本公司同系列产品检测，并比较发光强度情况。
结论：本产品Firefly及Renilla发光强度稍高于竞品，孵育10min检测Firefly/Renilla比值与竞品相近。
图3. 本公司产品与竞品发光强度对比情况
| MA0520 | 竞品V | 竞品P | |
| Firefly/Renilla | 3.83 | 3.69 | 3.55 |
（4）本公司产品与竞品发光稳定性对比情况
方法：将Firefly&Renilla萤光素酶载体共转染入CHO-K1细胞，24h后分别用本试剂盒及竞品检测，并比较发光稳定性情况。
结论：本产品Firefly及Renilla发光强度稍高于竞品，发光稳定性与竞品相近。
图4. CHO-K1细胞内MA0520及竞品Firefly&Renilla萤光素酶发光稳定性对比情况
（5）在哺乳动物细胞多种培养基中检测Firefly及Renilla萤光素酶发光信号
方法：将Firefly及Renilla萤光素酶稀释在多种培养基中，与Firefly Luciferase检测工作液及Renilla Luciferase检测工作液1：1混合后，检测发光信号。用DMEM培养基进行数据归一化。
结论：本双报告基因体系兼容多种培养基。
图5. 本产品在不同培养基中发光检测情况
（6）Firefly&Renilla发光淬灭效果
方法：相同浓度的Firefly、Renilla萤光素酶的体系中，依次加入本产品及竞品的Firefly和Renilla反应液，分别记录两者萤光素酶的发光强度以及淬灭情况。
结论：本产品的双酶发光强度稍高于竞品，淬灭效果显著强于竞品。
图6. 发光淬灭效果检测情况
关键词
Glow Dual Luciferase, Glow Firefly&Renilla, 双酶报告基因