问题解答

胶原酶消化组织(细胞)类型?

胶原酶IV型:建议用于胰腺中的胰岛细胞消化

胶原酶II型:建议用于骨,心,肝,甲状腺和涎腺细胞原代分离

胶原酶I型:建议用于上皮,肝,肺和肾上腺皮质细胞原代分离

抗荧光衰减封片剂固定不住?

封片剂分两种:流动的和凝固的;美仑封片剂(MA0236/ MA0235/ MA0222/ MA0221)是甘油的,也就是流动型的,故此不是凝固型,如果担心移动,可在盖玻片周围用指甲油密封,并置于4℃或者-20℃避光保存;储存不能竖立,最好平放。

怎么确定买哪条通路的抑制剂?

首先:每条通路的靶点有很多,其次:这个抑制剂不一定作用您选的靶点,最好是您找到相应想做的靶基因,针对性挑选这个靶基因所对应的抑制剂或者激活剂,后续需要用蛋白水平和RNA水平验证,最好有文献支撑。

GoldView I 和SYBR Green I

GoldView I(MB0078)是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型核酸染料。采用琼脂糖凝胶电泳检测DNA时,GoldView I与核酸结合后能产生很强的荧光信号,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同。
GoldView I是一种荧光色素,激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm。GoldView I不仅能染DNA,也可用于染RNA,GoldView I与细胞中DNA和RNA结合量存在差别,可发出不同颜色的荧光(即着色特异性),这是由于DNA是个高度聚合物,吸收荧光物质的位置较少,发绿色荧光,而RNA聚合度低,能和荧光物质结合的位置多,故发红色荧光。
通过小鼠皮下注射实验,尚未发现GoldView有致癌作用,而溴化乙锭(EB)是一种强致癌剂,因此用GoldView代替EB不失为一种明智的选择。

区别:GoldView I特别适合于大片段DNA的检测(大于1kb的片段,检测灵敏度与EB相当);当DNA片段小于1kb时,检测灵敏度低于EB,特别是低于500bp的片段,GoldView I型可能亮度很弱或检测不到。如果检测小片段的DNA,请选用GoldView Ⅱ(MB0077)型核酸染色剂,该染色剂适合于检测所有片段大小的DNA片段。

SYBR Green(MB3387)是高灵敏的DNA荧光染料。适用于各种电泳分析,操作简单,无须脱色或冲洗。至少可检出20 pg DNA,高于EB染色法25~100倍。与dsDNA 结合荧光信号会增强800~1000倍。用核苷酸胶体染料染色的凝胶样品荧光信号强,背景信号低。可适用于多种电泳分析:琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳等。核苷酸胶体染料与双链DNA的亲和力非常高,因此可用作电泳前染色,对分子生物学中常用的酶(如Taq酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等)没有抑制作用,另外核苷酸胶体染料与EB相比,诱变能力大大降低。

PHA-M和PHA-L有区别?

PHA-L是纯化的L4,主要功能就是作为T淋巴细胞的刺激原,广泛用于免疫学研究(如作为INF-γ ICS、ELISPOT实验的阳性对照;或作为PBMC培养的刺激物),也可以作为顺行神经示踪剂;PHA-M是植物血凝素的粘性蛋白形式,两者成分相当,主要用于刺激外周单个核细胞增殖,促进某些细胞因子的产生和膜表面蛋白的表达。

固定液有晶体析出

美仑固定液MA0192,有晶体析出不影响,可以室温或15-20℃水浴溶解之后使用。

染色实验染的很少,荧光很低

说明书给的条件是通用条件,可以跟据自己实际实验情况调整,例如:工作液浓度,染色时间,孵育条件。

核磁峰不对?

有些产品检测如果用DMSO作为溶剂的话,DMSO溶剂峰的位置可能会跟试剂中H的位置有重叠,积分出来可能会少H。DMSO溶剂的峰比较大,可能盖住了试剂里的H。

标准品做的液相图谱不太好?出的峰不确定是不是样品峰?

液相条件不一样,结果是不一样的,标准品可以按照对应批次的美仑液相条件检测;确认是否为样本峰,做个溶剂对照一下,如果溶剂没有那个峰,而样品有峰,那就是了。

支原体预防和清除试剂有什么区别?

美仑支原体预防剂(MA0339)可以用于防止支原体污染;支原体清除剂(MA0340)可以用于消除细胞中已有的支原体污染,加入支原体清除试剂,细胞会长得稍慢点,但能长;如若支原体清除后,可以换成预防试剂长期使用,清除试剂不建议长期用。

双酶检测试剂盒常见问题

1酶标仪检测,酶标仪的设置条件是什么?

需要选择化学发光模式

2.双酶检测范围

双酶是在转录水平上的检测

3.转染是瞬转还是稳转?

美仑对应检测的是瞬转的

4)可以用于植物么?

闪光型(MA0517),只要细胞充分破碎,都可以用;因为是先提蛋白,再检测,所以可以用于植物;辉光型(MA0519),原位裂解肯定破碎不充分,所以才针对哺乳动物细胞使用,植物最好不用,第一可能裂解不充分,第二没有数据支撑。

Cy5跟Cy5-NH酯有什么区别?

Cy5是一种用于标记肽, 蛋白质, 寡核苷酸的氨基基团的反应染料。 激发波长 (nm): 648, 发射波长 (nm): 662. Cy5-NH酯更广泛应用于多肽,蛋白,核苷酸等,还能用于纳米材料等;EX激发波长 646 nm EM发射波长 664nm;Cy5一般是用水溶解的,如果是易降解的蛋白质,当使用DMF或DMSO是不可取的,需要用Cy5-NH酯,如需要氨基反应探针可选择Cy5-NH酯,Cy5-NH也可以用水溶。

购买美仑复苏好的细胞,注意事项

收到细胞后, 显微镜下观察细胞形态是否正常,对于贴壁细胞则要注意看贴壁情况是否良好,观察细胞密度,确认细 胞无异常, 用 75%酒精对培养瓶表面进行消毒处理,将培养瓶置于细胞培养箱中静置培养 3-4 小时,以恢复细胞 状态,如果细胞密度不高,建议过夜培养。若细胞密度超过 80%,则可以根据以下提供的传代步骤进行传代;若细胞密度未达到 80%,则先吸除 原来培养瓶中大部分的培养基,留下 5-10ml 左右,稍微拧松瓶盖,继续放入细胞培养箱中培养,直到细 胞密度超过 80%时再进行传代。中途如觉得细胞长的较缓慢,可向培养瓶中添加5%的血清。

酵母培养基和酵母粉区别?

酵母培养基是一大类,包括YPD培养基,有些是用酵母粉配置的;具体配置哪种酵母培养基,可以找下对应配方。

SOSG单线态氧荧光探针常见问题

1单线态氧就是活性氧吗?

单线态氧属于活性氧,是普通氧的激发态。单线态氧虽不是自由基,但因解除了自旋限制所以反应活性远比普通氧高。

2SOSG甲醛溶液滴入水溶液中,会有荧光强度么?

SOSG甲醛溶液滴入水溶液中会有荧光强度的,水也是有单态氧的,有的话就有荧光强度。

3单线态氧加入甲醇最多能保存多久?

具体时间不确定,因为空气中有氧,无论是放甲醇中还是粉末,荧光强度都会一点点衰减,放-80低温衰减的会缓慢一点。

4能检测细胞里的单线态氧么?

不可以的,一般细胞检测活性氧用DCFH-DA探针较多。

5被检水溶液怎么制备?

用甲醇配成浓度约5mM的储液,即向每管100μg包装的小瓶里加入33µL甲醇。使用前立即准备本试剂的工作溶液,并在实验结束后丢弃任何多余的稀释试剂。SOSG单线态氧荧光探针适用于水环境,最佳稀释缓冲液和工作浓度应由经验确定,一般建议起始浓度范围是1~10µM。

外泌体试剂盒常见问题

1)提取方法,适用范围

我们外泌体试剂盒MA0403采用沉淀法,沉淀法适合WB检测,RT-PCR

2一次实验需要多少体积血清/血浆

至少0.5 ml血清/血浆样本。更少的血清体积虽也可以提出外泌体,但产量可能较低,不满足后续实 验需求。

3本品提取的外泌体如何应用于下游实验?

可直接使用下一步实验的试剂处理离心后的沉淀。例如,可直接加入合适裂解液后,用移液器 吹打或使用匀浆器重悬沉淀后进入RNA和蛋白提取流程。如需重悬,可用适量1 × PBS重悬离 心后的沉淀。

4血清/血浆外泌体沉淀如何重悬?

血清提取的外泌体沉淀可使用适量1 × PBS或其他下游实验所需试剂进行重悬。沉淀重悬有时 会较为困难,若后续实验对外泌体的完整性无要求,可使用低速匀浆器进行重悬。

5)细胞提取外泌体的注意事项

1). 美仑公司MA0402适用于各种类型细胞培养液上清中外泌体的提取。为防止 FBS 中较多的牛外泌体造成污染,可在 细胞培养至 50%-70%左右更换无血清培养基或者不含外泌体的血清培养基,继续培养约 12~48h 后收集 上清使用。也可直接使用不含外泌体的血清培养基直接培养细胞,后续直接收集细胞培养液上清进行外泌 体提取。

2). 一次实验需要多少体积细胞培养液取决于上清中外泌体的量,可能受细胞类型、状态、数目的影响各不 相同,根据实验需求决定样本起始量。

3). 用固定角度的离心机离心时,需标记管子的摆放方向。一般样本中外泌体含量较少,离心后可能肉眼观 察不到沉淀,标记方向后,在重悬时将 1×PBS 朝离心管靠外侧的内壁反复吹打洗脱即可。

4). 离心后的沉淀可用 100-200 μL 的 1×PBS 重悬后使用,也可使用下一步实验的试剂直接处理沉淀。 例如,可直接使用裂解液吹打重悬沉淀后进入 RNA、蛋白质提取流程。

细胞核染料DAPI、Hoechest33258、Hoechest33342区别

DAPI是可以通过完整细胞膜的,可以染活细胞也可以染死细胞,但是因为DAPI是半透性的,染活细胞的效果没有染死细胞好。所以DAPI一般用来染固定后的细胞;Hoechst透膜性比DAPI好,染活细胞更常用, Hoechst33258容易透过细胞膜,而Hoechst33342多用于细胞凋亡检测,还可以PI和Hoechst33342双染做流式;另外,Hoechst33342的细胞毒性比Hoechst33258要小。

有些绿色荧光的染料,用红光荧光的滤光片也能看到红色,是怎么回事呢?

市面上现在染料有的存在窜色现象,浓度稍大产生了聚合物沉淀,而改变了发射波长,建议:可以试下降低染色浓度,调整一下反应条件,这种情况会改善的。

细胞污染,真菌,细菌和黑胶虫,支原体对应处理试剂

细菌:青霉素(25-100ug/ml)链霉素(25-100ug/ml) 、庆大霉素(10-100ug/ml)

真菌:MB1014两性霉素B

支原体:MA0340支原体清除试剂;MA0339支原体预防试剂;MA0144支原体检测试剂盒

黑胶虫:一般为血清原因,建议勤换液,PBS清洗,换瓶

溶酶体染料:溶酶体红色荧光探针(LysoTracker Red DND-99)(MB6041)/ 溶酶体绿色荧光探针(LysoTracker Green DND-26)(MB6042)/溶酶体绿色荧光探针(LysoSensor Green DND-189)(MB6043)

荧光颜色不同、波长不同:MB6041为红色荧光(577nm,590nm),MB6042(504nm,511nm)和MB6043(443nm,505nm)为绿色荧光。

原理不同:MB6041该类探针是对活细胞酸性区式进行选择性染色的荧光染料。具有几大重要的特点,1)选择性标记酸性细胞器;2)纳摩尔级(nM)浓度即可有效标记活细胞;3)具有多色探针提供,可根据情况对样品进行多标实验。MB6042  LysoTracker结构上由一个荧光基团和相连的弱碱基构成,可自由穿过细胞膜,一般聚集在球形细胞器上,适用于观察溶酶体内部生物合成及相关发病机理。Lysotracker中性pH下仅仅发生部分质子化,因此该探针标记细胞器的原理可能与其完全质子化并滞留在细胞器膜上有关。MB6043 LysoSensor系列探针是主要对活细胞中的酸性区室(如溶酶体、顶体精子)动态合成和功能进行研究的一类荧光探针,该类探针的染色具有向酸性,可通过质子化作用在酸性细胞器内累积。该类探针的这种质子化作用还可解除染料的荧光淬灭性,使其所发射的荧光强度更强。因此,与LysoTracker系列探针相比,LysoSensor系列探针随着细胞器的酸化程度其荧光强度呈pH依赖型(向酸)增强。

需注意:MB6042溶酶体绿色荧光探针(LysoTracker Green DND-26) 染色后可以固定,且其维持时间长,要是做示踪的话更适合;MB6043溶酶体绿色荧光探针(LysoSensor Green DND-189) 不可固定,其依赖低pH,所以染色后固定会严重影响pH从而严重影响发光。同时也因为MB6043随着细胞器的酸化程度其荧光强度呈pH依赖型(向酸)增强,故此能看到颜色变化。

线粒体荧光探针试剂盒:线粒体红色荧光探针(MitoTracker Red CMXRos)(MB6046)/ 线粒体绿色荧光探针(MitoTracker Green FM)(MB6044)

MB6046/MB6044均为线粒体荧光探针,MB6044为绿色荧光(490nm,516nm),MB6046为红色荧光(579nm,599nm),两者均可染活细胞(不能染组织)。与MB6046不同的是,MB6044定位线粒体的能力不受线粒体膜电位的影响,但MB6044不适合于醛类固定,会使荧光信号丢失,因此更适合活细胞染色。而MB6046染色后可根究实验需求进行固定(醛类)和透化(Triton-100),探针依然维持在细胞内,且更适合双标实验。

Fura-2/Fluo-3/Fluo-4区别?

1、Fura-2 AM的荧光比较弱,最大激发波长为369 nm,最大发射波长为478 nm,并且其荧光不会随钙离子浓度改变而改变;Fura-2 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fura-2,从而被滞留在细胞内。Fura-2和钙离子结合后,最大激发波长为335 nm (最大激发波长随离子浓度的不同而有所不同),最大发射波长为505 nm。

2、Fluo-3 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3,从而被滞留在细胞内。Fluo-3游离配体几乎是非荧光性的,其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。Fluo-3可以和钙离子结合,结合钙离子后可以产生较强的荧光,最大激发波长为506 nm,最大发射波长为526 nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488 nm左右,发射波长为525-530 nm。

3、Fluo-4 AM是最常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一。Fluo-4 AM将Fluo-3 AM结构中的氯原子替换成了氟原子,导致它的最大激发波长会向短波长处偏离10 nm左右。这个波长更接近于氩激光器的波长488 nm,所以用氩激光器激发时,Fluo-4的荧光强度会比Fluo-3强一倍,Fluo-4可以和钙离子结合,结合钙离子后可以产生较强的荧光,最大激发波长为494 nm,最大发射波长为516 nm。Fluo-4 AM(钙离子荧光探针) 是配制于无水DMSO (anhydrous DMSO)中的储存母液,浓度为2mM。

细胞凋亡常见问题

1Annexin V/PI试剂盒为什么用不含EDTA胰酶?

Annexin V 是 Ca 依赖性蛋白, 所以不能加入 EDTA, 防止 EDTA 螯合了 Ca 离子从而影响 Annexin V, 进而影响结果。

2Annexin V/PI试剂盒做单染用普通细胞还是凋亡细胞?单染一定要做么?

单染一定要做,需要画十字门调补偿单染可以用正常细胞做,但是正常细胞凋亡有的比较少,画门可能不是很清晰;建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI 单染和 Annexin V-FITC 单染 3 个对照组,正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用 CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),FITC 为横坐标,PI 为纵坐标。

3凋亡试剂盒Annexin V不受GFP等干扰?

美仑凋亡试剂盒有三款,Annexin V-FITC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒;Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒;AnnexinV-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒(50T);其中货号MA0220,AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒,FITC发绿色荧光,PI发红色荧光;货号 MA0428 AnnexinV-FITC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒中,将PI更换为了 7-AAD,也发红色荧光,但其发射光谱较PI窄,且发射波长更长,对其他检测通道的干扰更小;货号MA0429 AnnexinV-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒,选择PE(MB5943藻红蛋白)与Annexin V 偶联,其中PE 的激发波长为为495,545或565nm ,发射波长575nm,发出红色荧光,在多色荧光分析中,在待检测的细胞已经表达GFP等绿色荧光蛋白的情况下,推荐客户选购Annexin V PE/7-AAD试剂盒。

4Annexin V-FITC/PI可以做贴壁细胞原位荧光检测吗?

美仑Annexin V-FITC/PI可以做原位荧光检测,注意:一定要用试剂盒里的buffer;染料加量适当提高。

5)单纯检测磷脂酰丝氨酸暴露的情况,不需要染核,可以用Annexin V/PIMA0220)试剂盒么?

可以用的,不染核的话,不用PI就行了

(6) 细胞活力(活死细胞染色)检测试剂盒和细胞凋亡检测试剂盒有什么区别?

细胞活力(活死细胞染色)检测试剂盒(MA0361)是区别活细胞总数和死细胞总数;死细胞包括:坏死,死亡,凋亡; 细胞凋亡检测试剂盒(MA0220)可以区别出活细胞,早期凋亡细胞,晚期凋亡细胞,坏死细胞

7TUNEL细胞凋亡检测试剂盒适用于组织切片吗?

可以用于组织切片,如果是新鲜组织,需要固定液固定,做成切片

8Tunel实验,加抗荧光衰减封片剂之后怎么保存呢?能保存多久?

常温;避光放就行;保存时间具体得看荧光,但是荧光总会衰减;一般两三天没问题。

9Tunel怎么计算凋亡指数?

在共聚焦下,凋亡率(凋亡指数)的计算方法如下:每个样品随机计数4个视野,按公式计算 凋亡指数(AI):AI=凋亡细胞数/(凋亡细胞数十正常细胞数)。统计学方法 结果采用x土s表示,多组样本均数用单因素方差分析,组间两两比较用Scheffe检验,两样本均数的比较用t检验.

10)台盼蓝/活死细胞染色试剂盒区别

活死细胞染色试剂盒:Calcein AM是一种可对活细胞进行荧光标记的优良染色试剂,其能够轻易穿透活细胞膜。胞内的酯酶会将其水解为Calcein(钙黄绿素)留在胞内,发出强绿色荧光;而碘化丙啶(PI)不能穿过活细胞的细胞膜,但其能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核,并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光(激发:535 nm,发射:617nm),从而对死细胞染色。是基于钙黄素AM和碘化丙啶(PI)的活死细胞染色试剂盒,可用于动物细胞样品的活力和毒性检测。而台盼蓝是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成蓝色。

11)细胞周期试剂盒(MA0334)细胞染色时间到了,但是来不及上流式怎么办?

可以先固定,加入 1ml PBS 充分重悬,成单细胞,轻轻边涡旋边缓慢滴加 3ml 预冷的无水乙醇,至 终浓度 75%,4℃固定 4h 以上,或者 4℃静置过夜(18-24h)效果更佳。固定后的细胞 可以-20℃保存一个月,之后检测时离心即可。

细胞增殖常见问题

1CCK-8对于不同的细胞,灵敏度是否一样?

不一样,悬浮细胞与贴壁细胞相比较难显色。对于贴壁细胞,一般加入CCK-8培养0.5-4小时吸光度已经很高,但对于悬浮细胞则可能吸光度较低,可以通过延长CCK-8的加入时间或增加细胞数量来解决。

2)哪些物质会影响CCK-8的测定?

当有氧化还原性物质存在时会影响CCK-8的测定,因此当所加药物为氧化还原性物质时需要换液再进行检测。

3CCK-8试剂盒如何设定空白对照?

在不含细胞的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时,还应考虑药物的吸收,可在不含细胞,加入药物的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度作为空白对照。

4CCK-8试剂盒铺板细胞量有什么要求吗?

96孔板细胞计数的时候一般是104,我们铺96孔板,细胞浓度是5*104,取100ul铺板;可以您自己对细胞计数,保证每孔细胞数量一致。或者可以计数,方法:按不同细胞数铺板,贴壁后加cck,孵育1小时,然后检测,OD值在1.5左右是最佳铺板数

5CCK-8试剂盒反映时间怎么确定?数值必须是1么?

0.1-2.5都可以,最佳是1.0左右

6CCK-8试剂盒细胞能一边培养一边检测?

培养一段时间测CCK-8,然后换液后可以接着养。

7)做CCK-8经常有气泡,对吸光度有影响,有什么办法去除么?

有气泡,没办法去除,但是可以避免有气泡,加药时枪头抵着孔壁,慢点加液体,基本不会产生气泡,如有条件可将96孔板离心,这样气泡就会消失

8CCK-8试剂盒OD值偏高?

可以确认下培养时间,一般肉眼可见颜色变化即可检测

9CCK-8除了用酶标仪还可以用什么仪器?紫外分光光度计行么?

一般CCK-8都是用酶标仪,紫外分光光度计最好不用,因为紫外我没记错一次只能测一个孔吧,而且还得把孔内液体吸出来到紫外用的皿里,而且检测时间很长,CCK-8对孵育时间敏感,这样误差太大了

10CCK-8会导致细胞死亡吗?

CCK-8本身对细胞毒性特别小,作用时间长不会导致细胞都死亡,但是细胞长满了,本身代谢会引起细胞死亡

11CCK-8试剂盒每次测定的数值不一样,是什么原因?如何解决?

可能会有以下几个原因:

1)当在培养箱内培养时,培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发,由于体积不准确而增加误差。一般情况下,最外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。

2)有可能会因为CCK-8沾在壁上而产生误差,建议在加入CCK-8后,轻轻敲击培养板以帮助混匀。

3)每孔的细胞数量过多或过少。请预先在1,000~100,000个/孔范围内摸索条件。

4) 重复试验请保证孵育时间、接种细胞数相同。

(12)CCK-8试剂盒和EDU试剂盒区别:

如检测单个药的毒性推荐EDU,EDU检测增殖最准确的方法,因为他是检测DNA合成情况的,cck因为伴随代谢,有些药物影响到代谢,所以有时候最后测得的抑制率并不一定是和细胞毒性成正比的;但是DNA变化是准确的,而且可以用于流式     

如前药物筛选化合物多的话建议用CCK-8,因为edu操作步骤比较复杂,不适合前期药物筛选,cck反映速度快,操作简单,适合前期实验

13EDU细胞孵育时间怎么确定?

时间可以去ATCC上看下细胞倍增时间,通常宜继续孵育细胞周期10%左右的时间。

143%BSA作用是什么?

3%BSA作用封闭稳定荧光

15EDU试剂盒做流式怎么收集细胞呢?固定的细胞都是碎片了?

孵育完edu之后收集细胞,然后在固定,之后按照悬浮细胞往后做,每步均需要离心3200rpm/5min

16) EdU染色之后,先用荧光显微镜测一下,再进行细胞核复染,再测一次呢,还是胞核染好了一起测就行?

都可以,可以染完edu,先用显微镜看下,然后在核复染,再看下;也可以染完edu,直接染核,然后在不同波长刺激下看。

17)染完了要立即用荧光显微镜观察吗,可以放多久?

最好立即看,因为荧光有猝灭,如果想保存一段时间可以加封片剂,但是也建议先看一下在加封片剂,在观察,因为加封片剂荧光也是有所衰减的,肯定没有刚染完的好

18)洗涤液通透液怎么配?

洗涤液是3gBSA加100ml的PBS;通透液TritonX是液体,也就是0.4ml到100mlPBS,配完放4度就行。

WB常见问题

(1) 内参过爆

大连美仑ECL是飞克级的,灵敏度比较高,内参蛋白的话,建议使用的时候减少ECL用量,如果能调节时间的话,尽量时间短一些,如果手动曝光的话就1-2s就可以,一抗洗膜时间和洗膜次数可以适当延长

2)曝光磷酸化蛋白比较模糊

可能原因:

1)因为磷酸化蛋白本身含量就少,特异性在不好,很容易出现这样的条带,抗体一定要买好一点的

2)目的蛋白如果较大,转膜时间要延长,适当调整转膜时间

3)适当调高一抗二抗稀释倍数

4)磷酸化封闭用tris体系的BSA,封闭时间可以长一点。

3)预制胶两边marker有些倾斜或者不在同一条线上

预制胶存在边缘效应,样本允许的条件下可以把两边空出来,或者上一些废样做保护

4)样本-20℃放了一年了,还能用么?效果会不会有影响?

组织久了,效果会有点影响,但是不好说影响大不大,WB也是需要看具体蛋白情况,有些蛋白可能就是不好跑,您可以先做下预实验,挑选几个样本,跑个内参,看下蛋白弥散不?如果弥散了其他目的蛋白肯定也不好了,如果不弥散,还可以的话可以做下目的蛋白,但这个检测只能说明样本还能跑蛋白,但是不保证每个目的蛋白都一定能跑好

5loading buffer 加没加蛋白酶抑制剂?

美仑的loading buffer 没加蛋白酶抑制剂,蛋白酶抑制剂是在蛋白提取的时候加的,这只是一个上样的缓冲液;缓冲液在没有稀释前,有高浓度的变性剂,蛋白酶是无法存在的

6)蛋白印记膜再生液能否重复用

试剂pH很重要,重复用会使pH升高,效果减弱,建议不要重复使用

7)预制胶需要压样么?可以直接跑吗?

美仑预制胶不用压样,直接跑就可以,电泳条件:150 V,30-40 min,当溴酚蓝指示带电泳至凝胶底部,或实验预定位置时,即可结束电泳。如果想得到更加清晰平直的条带,可降低电压至 100-120V,并适当延长电泳时间。当然压样也可以,条带可能会更加好看。

8sds-page用预制胶跑完不在一条线上?

可能原因:样品的蛋白浓度或者离子影响了迁移速度,上样量一样,但是蛋白浓度不一样,那么蛋白量就不一样,蛋白的量相对越多,跑的越慢,但是做蛋白表达不影响结果的;或者也可以:如果蛋白浓度差的多建议调整浓度,可以让蛋白量一致(比如都是20ug,根据蛋白浓度),调上样量,差的多的可以用上样缓冲液补.

9sds-page用预制胶跑完条带有点弯曲?

电泳的时候保证内槽液体不漏液,降低电泳电压,浓缩胶60V,分离胶80V,,如果方便可以放些冰块降温,上样前,样品重新煮一下,冷却离心,取上清

10sds-page用预制胶跑条带出现笑脸。

可能原因:电压高,迁移快,两边比中间慢,其实正常,想要改善可以调电压到80V。

11sds-page用预制胶跑条带出现哭脸

可能原因:蛋白堵塞,样本可能是有杂质堵住了胶孔,改善制样过程。

12)预制胶电泳槽内槽加满电泳液后,如看到个别胶孔里有絮状物

用注射器或其他工具吸取电泳液轻轻吹打加样孔,以去除加样孔内残留的储存缓冲液和杂质,后在正常上样。

13)预制胶跑胶过程出现黄化

麻烦核对一下电泳缓冲液,美仑预制胶HEPS体系,不可使用tris-甘氨酸体系缓冲液,1X 变性凝胶电泳液参考配方为:100 mMTris, 100 mM HEPES, 0.1% SDS, 2 mM EDTA。

14)预制胶适用于哪些仪器?

美仑预制胶兼容性强,兼容目前市场各种mini电泳槽, 包括:Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3 /Tetra System);Hoefer Mighty Small (SE250/SE260/SE280);Life Technology Novex Mini-Cell (请与免费提供的特制挡板配合使用);北京六一 DYCZ-25E、DYCZ-24DN、DYCZ-24K、DYCZ-24KS、DYCZ-24KF;君意东方 JY-SCZ2+;天能 VE180;以及其它胶板宽度在10cm的电泳槽。如是伯乐款仪器可以参考说明书中胶条反装,或者购买伯乐款专用

15)裂解蛋白,呈果冻状,还有点胶状呢?

离心时间过长,基因组出来了,正常离心后,取上清就可以,DNA会在沉淀里面,12000rpm,或者重提的话裂解时间缩短一些。

16)丽春红染膜效果不好?

可能原因

1)膜上蛋白太少了,丽春红识别率是要低于曝光的,可以正常曝光看下结果。

2)如果染膜之前用牛奶封闭过,封闭的蛋白染膜是不会在膜上的

部分产品单位写的g,收到产品是液体?

部分产品由于本身熔点,自身性质,就是液体状态,例如肉桂醛,常温就是液体。

粉末状产品明明看到母液已经完全溶解了,稀释之后又有析出?

因为粉末在液体中有一定的溶解度,尤其有的粉末用有机试剂溶解后需要用PBS,水稀释,而产品本身不溶于水,这时候稀释就会有析出,可以母液配置完成后超声一下,稀释之后再超声水浴一下,这样基本可以溶解;如析出的结晶依然存在,那就是溶解度达不到,需要调整下溶解度。

有些产品只能用DMSO溶解,给动物DMSO还需要小于5%,怎么办?

(1)超声水浴加速溶解

(2)如果是灌胃方式给动物可以混悬液

(3)可以选一些助溶剂例如PEG300,吐温80等。

收到化合物颜色/包装/溶解度和之前不一样?

同一产品不同批次之间存在差异,这是正常现象,麻烦以收到本次产品的COA为主。

收到产品感觉包装品是空的?

如果您购买的产品的量非常小,同时有些产品在冻干的过程中粘附在管壁上形成薄薄的一层,可能观察不到产品的存在。您可以加入指定溶剂(参照操作手册)并涡旋或超声震荡使之完全溶解。

对于蜡状或油状的产品很难取出称量它们的质量,我们建议您用合适的溶剂直接溶解该化合物;对于具有吸湿性的化合物,暴露在空气中会吸收水分,呈现液滴状,这种产品需要放置在干燥器中保存。

化合物等产品写非无菌包装,用于细胞怎么处理?

灭菌方式,我们建议通过0.22μm微膜过滤方式除菌,请勿采用紫外,射线或者高温灭菌方式,否则会影响化合物活性,甚至破坏其结构导致彻底失活。

产品到了冰化了影响使用么?

对于需要低温储存的产品,我们在运输时候都会采用冷藏包装,但是部分由于外界气温过高,运输时间较长,对于普通冷藏包装,途中可能会温度升高,这些都是没有问题的,因为这种普通冷藏只适用于那些短期内(2周)高温依然稳定的产品,建议低温的储存条件,只是长期储存时候的条件,您可以放心使用。对于某些特殊的产品,如抗体,我们会采用干冰冷藏包装,确保全程低温。美仑公司都对产品性状进行了严格的稳定测试,行业经验丰富。

产品怎么是ug/mg,不是百分之多少?

麻烦收到产品以COA内容为准,不是所有产品都是液相检测方法,有些产品是效价检测的,我们检测方法一般是按照药典检测的。

原料药钠盐和钾盐形式

有些化合物钠盐钾盐形式和原料药之间,药效基团是一样的,只不过物理性质有所改变,盐形式溶解性会好一点。

原料药和标准品的区别

主要是用途的不同。
原料药:主要是用于做成制剂,实验室可用于动物体内或体外试验(细胞试验)。
标准品(对照品):是一个参照物,一般都是用来含量测定用的,因为是一个参照物,其更侧重含量的准确性。可以理解为准确标定过的原料药,所以也可以用于动物体内或体外试验(细胞试验)。

关于产品分装及溶液配制

产品分装:您收到货物后最好不要自己进行分包,因为分包环境、包装材料等因素可能导致分包后的产品变质;如您有特殊包装要求,请在订购时候与我们客服代表阐明,当然价格会做适当调整。对于开盖后,长期未使用的,请务必重新密封好,建议Parafilm封口膜,并按照相应储存条件使用。如果放置时间过长,超过产品有效期,建议您重新购买,以免影响实验质量。

购物车