产品简介:
BL21(DE3)超级感受态细胞,是一种可以用于IPTG诱导下的重组蛋白表达的E.coli BL21(DE3)即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化,在严格按照使用说明进行操作时,转化效率可以达到1.0±0.5×107cfu/μg DNA。
BL21适合T7启动子驱动的重组蛋白诱导表达系统,比如常见的原核表达载体pET系列。该菌株缺失内源性蛋白酶的大肠杆菌B菌株,它能有效避免重组表达蛋白的降解,广泛用于重组蛋白的表达。BL21(DE3)是被λ噬菌体DE3溶原化所得BL21衍生菌株。噬菌体DE3中的T7 RNA聚合酶受到lacUV5启动子控制。外源添加IPTG可以诱导BL21(DE3)菌株中T7 RNA聚合酶的快速表达。T7 RNA聚合酶进而识别表达质粒载体上的的T7启动子,从而驱动重组蛋白的高效表达。
BL21(DE3)菌株的基因型为F- ompT hsdSB(rB– mB– ) gal dcm(DE3) 。其中ompT可减少外膜蛋白酶的表达量,从而减少重组蛋白的水解,提高表达产量;hsd基因变异可致菌株细胞内的I型限制酶EcoK或EcoB活性缺失,从而提高PCR产物的转化效率;dcm可消除甲基化对腺嘌呤和胞嘧啶的影响,从而帮助某些外源质粒复制,比如携带易受甲基化影响的酶切位点的外源质粒。
保存条件:-80ºC保存,一年内有效。避免反复冻融,通常制备6个月后转化效率随保存时间延长而逐渐降低。
运输条件:干冰运输。
注意事项:
– 感受态细胞禁止反复冻融,并应尽可能避免冻融,反复冻融会导致转化效率大幅下降。
– 感受态细胞融化后,须尽快加入待转化样品,不宜在无转化产物的情况下放置时间超过10分钟或以上时间,以免降低感受态细胞 的转化效率。
– 待转化样品的体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%,样品体积过大会导致转化效率下降。
– 感受态细胞对于温度变化非常敏感,需要避免出现不应有的使用说明之外的温度变化。
– 感受态细胞对于机械力非常敏感。加入待转化样品时应轻柔操作,不能使用移液枪吹打混匀。
– 通常仅建议取部分样品用于转化,这样万一遇到转化失败的情况,还留有样品可以再次进行转化。
– 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
– 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。