产品简介:
BL21(DE3)PLysS超级感受态细胞,是一种可以用于IPTG诱导下重组蛋白表达的E.coli BL21(DE3)PLysS即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化,在严格按照使用说明进行操作时,转化效率可以达到1.0±0.5×108cfu/μg DNA。
BL21(DE3)是BL21被λ噬菌体DE3溶原化的衍生菌株,在lacUV5启动子控制下可表达噬菌体T7 RNA聚合酶(相关基因序列已经整合到细菌染色体中)。IPTG可以诱导BL21(DE3)菌株中T7 RNA聚合酶的高表达,因此BL21(DE3)菌株适合T7启动子驱动的重组蛋白诱导表达系统,比如常见的原核表达载体pET系列。
BL21(DE3)PLysS菌株携带pLysS,具有氯霉素抗性,可以表达能抑制T7 RNA聚合酶的T7溶菌酶(T7 lysozyme),从而可以抑制T7 RNA聚合酶在目的蛋白被IPTG诱导前的本底表达,即导致本底性的外源重组蛋白的表达被有效抑制。这种情况下特别适合于影响细胞生存和活力的外源毒性蛋白的表达。
BL21(DE3)PLysS菌株基因型:F- ompT hsdSB(rB–, mB–) gal dcm(DE3)pLysS Camr。
保存条件:-80ºC保存,一年内有效。避免反复冻融,通常制备6个月后转化效率随保存时间延长而逐渐降低。
运输条件:干冰运输。
注意事项:
– 感受态细胞禁止反复冻融,并应尽可能避免冻融,反复冻融会导致转化效率大幅下降。
– 感受态细胞融化后,须尽快加入待转化样品,不宜在无转化产物的情况下放置时间超过10分钟或以上时间,以免降低感受态细胞 的转化效率。
– 待转化样品的体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%,样品体积过大会导致转化效率下降。
– 感受态细胞对于温度变化非常敏感,需要避免出现不应有的使用说明之外的温度变化。
– 感受态细胞对于机械力非常敏感。加入待转化样品时应轻柔操作,不能使用移液枪吹打混匀。
– 通常仅建议取部分样品用于转化,这样万一遇到转化失败的情况,还留有样品可以再次进行转化。
– 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
– 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。