产品简介
本产品是基于改良BCA法的蛋白质定量检测试剂盒,其检测原理是在碱性环境下蛋白质将工作液中的Cu2+还原成Cu+,随后Cu+与本品所含螯合剂以2:1的比例结合形成橙金色复合物(不同于传统BCA法的紫色产物),室温5 min即有较好显色效果,该产物在480 nm处具有最大吸光值。
产品优势
1、灵敏度高,检测范围广:本产品检测范围覆盖20–10000 μg/mL的宽线性范围,在此范围内可实现精确测定,准确性高于Bradford检测法;
2、节约样本:本产品使用酶标仪检测仅需10 μL微量待测样本;
3、反应迅速:本产品采用优化螯合剂使显色速度较传统BCA法更快,5分钟室温孵育即可进行检测;
4、操作便捷:本产品配套2-8 ℃保存的不同浓度BSA标准品,免除反复冻融与繁琐的稀释步骤;
5、兼容性好:本产品与大多数盐、缓冲溶液、螯合剂及表面活性剂有较好兼容性。
蛋白定量产品对比
美仑的四款蛋白定量检测试剂盒的主要特点和差异如下。
产品编号 | MA0079 | MA0081 | MA0082 | MA1610 | MA1611 |
产品名称 | Bradford蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂兼容型) | Bradford法蛋白定量试剂盒 | BCA蛋白定量/浓度测定试剂盒 | 即用型BCA快速蛋白定量试剂盒(0.02-2 mg/mL) | 即用型BCA快速蛋白定量试剂盒(0.02-10 mg/mL) |
检测方法 | 比色法 | 比色法 | 比色法 | 比色法 | 比色法 |
检测范围 | 0.1-0.5 mg/mL | 0.1-0.5 mg/mL | 0.02-10 mg/mL | 0.02-2 mg/mL | 0.02-10 mg/mL |
检测浓度下限 | 50 µg/ml | 50 µg/ml | 20 µg/ml | 20 µg/mL | 20 µg/mL |
待测样品体积 | 10 µL | 10 µL | 20 µL | 20 µL | 10 µL |
EDTA兼容性 | ≤100 mM | ≤100 mM | ≤10 mM | ≤10 mM | ≤10 mM |
还原剂兼容性 | DTT≤5 mM、β-巯基乙醇≤1 M | DTT≤5 mM、β-巯基乙醇≤1 M | DTT≤1 mM、β-巯基乙醇≤0.01% | 不兼容 | 不兼容 |
去垢剂兼容性 | Tween 20≤1%、Triton X-100≤1%、SDS≤1% | Tween 20≤0.015%,Triton X-100≤0.05%,SDS≤0.01% | Tween 20≤5%、Triton X-100≤5%、SDS≤5% | Tween 20≤5%、Triton X-100≤5%、SDS≤5% | Tween 20≤5%、Triton X-100≤5%、SDS≤5% |
检测时间 | 5分钟 | 5分钟 | 20-30分钟 | 5分钟 | 5分钟 |
孵育温度 | 室温 | 室温 | 37ºC | 室温 | 室温 |
保存条件
2-8 ℃保存,自生产之日起12个月有效。
运输条件
湿冰运输(按季节)。
注意事项
1.本产品可以采用酶标仪(微孔检测法)或者分光光度计(试管检测法)测定蛋白浓度,若使用分光光度计测定,根据比色皿的最小检测体积提高显色工作液用量,待测样本和标准品的用量可酌情增加也可不变(例如,待测样本与工作液按1:40比例使用,将25 μL待测样本或标准品加入比色皿中再加入1 mL显色工作液,室温孵育5 min上机读取吸光值)。使用分光光度计测定蛋白浓度时,各试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
2.建议绘制标准曲线所用标准品与待测样本同步进行显色反应与吸光值测定,以获得准确测定值,建议每次测定蛋白样本时,都绘制标准曲线。
3.由于本试剂盒显色反应速度较快,完成室温孵育5 min后,须在15 min内完成吸光值读取。若不得不在15 min后才能检测,或使用分光光度计检测的情况下样本数量较多时(≥15个),建议终止反应(孵育5 min后加入50 μL 1 M HCl),反应终止后应尽量在60 min内进行读数,此时吸光值读数变化较小,在此时间范围内读数误差较小。
4.若待测样本中含有浓度较高干扰物质(高于附表所述浓度),建议稀释或透析待测样本,若仍无法获得较准确测定结果请采用其它蛋白定量产品。
5.若待测样本中含有较高浓度的铜螯合剂,建议稀释、脱盐或透析待测样本,也可提高工作液中试剂B的浓度(如,将原本的试剂A与B的比例50:1改为50:2)。
6.若待测样本中含有较高浓度的硫醇、生物胺等还原剂,建议稀释或透析待测样本,若仍无法获得较准确测定结果请采用其它蛋白定量产品,如本公司的Bradford法蛋白定量试剂盒(MA0079或MA0081)。
7.若无法测定指定波长(480 nm)处吸光值,可以在460-500 nm之间的任何波长下测定,但标准曲线斜率和总体检测灵敏度将略有降低(<10%)。
8.本产品仅限科研使用。
9.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
实验数据
图1. 即用型BCA快速蛋白定量试剂盒(0.02-10 mg/mL)检测BSA标准曲线的效果图(室温孵育5、10和15分钟的标准曲线)