蛋白质半胱氨酸检测试剂盒(DTNB法)

产品组成和保存/运输条件

产品简介

蛋白质半胱氨酸检测试剂盒(DTNB法)（Protein Cysteine Assay Kit with DTNB）基于DTNB显色法，可定量检测细胞培养上清、血清、血浆、细胞及组织裂解液中的蛋白游离巯基与二硫键还原后总巯基含量，既能够检测蛋白表面暴露的游离巯基，也可检测蛋白高级结构中包埋的隐藏巯基。

巯基（-SH）是生物体系中高活性的功能基团，广泛存在于蛋白质、谷胱甘肽、辅酶A、游离半胱氨酸等多种生物分子中。蛋白游离巯基分为表面暴露型与结构埋藏型，共同构成总游离巯基；蛋白巯基可通过氧化形成二硫键（-S-S-），维持蛋白质空间构象，而游离巯基异常升高通常提示二硫键断裂、蛋白结构受损。传统巯基检测多依赖HPLC、毛细管电泳、色谱质谱联用等技术，操作繁琐、仪器要求高、检测通量低，难以满足大批量样本快速检测需求。

本试剂盒采用经典Ellman试剂（DTNB，5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)）显色体系。检测过程中通过蛋白变性处理舒展肽链，充分暴露蛋白内部巯基与二硫键，再经还原剂将所有二硫键彻底还原为巯基；体系中游离巯基可与DTNB特异性反应，生成在412 nm处具有特征吸收的黄色TNB阴离子，通过测定吸光度并结合GSH标准曲线，即可精准计算样本蛋白半胱氨酸含量。

图1. 蛋白质半胱氨酸检测试剂盒(DTNB法)工作原理图

本系列试剂盒可搭配使用，实现不同指标的差异化检测：如需检测蛋白质中二硫键的含量，通过设置未添加Reduction Buffer的样品组，可利用本试剂盒差值法计算蛋白二硫键含量；如需检测谷胱甘肽，可配套使用GSH和GSSG检测试剂盒(美仑货号：MA1516)。

本试剂盒性能优势显著：样品处理简便，体液样本可直接检测，细胞、组织样本仅需匀浆裂解取上清即可上机，整体实验可在4 h内完成。优化的检测缓冲液可螯合金属离子，有效防止巯基氧化降解，保障检测结果准确稳定。试剂盒配套齐全，自带DTNB显色液、专用缓冲液及GSH标准品/阳性对照，检测灵敏度高，最低检测限可达10 μM。适配96孔板高通量检测，小包装可完成100-200次检测，中包装可检测500-1000次，满足不同实验用量需求。

图2. 蛋白质半胱氨酸检测试剂盒(DTNB法)用于GSH标准曲线的检测效果图。
实测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。