快速FITC 抗体(蛋白)标记试剂盒

产品简介

美仑快速FITC 抗体（蛋白）标记试剂盒（Quick FITC Antibody(protein) Labeling Kit）包含蛋白质标记染料和去除多余染料所需的全部组分。异硫氰酸荧光素（FITC）可以与蛋白质上的氨基、巯基、咪唑基、酪氨酰基和羰基发生交联反应。然而，只有伯胺和仲胺的衍生物才能产生稳定的标记产物。反应在pH 8-9下效率最高，并且必须在无胺缓冲液如硼酸盐或碳酸盐/碳酸氢盐中进行。通常，蛋白质与15至20倍摩尔数的FITC反应，可导致几个FITC分子与一个蛋白质分子结合。装填有纯化树脂的离心柱简化了柱平衡、收集和监测重力流分的步骤。该系统能够有效去除多余的FITC，从而准确测定染料与蛋白的比例（F/P）和蛋白浓度。

本试剂盒可用于标记和纯化3次1mg (2mg/mL)或者6次0.5mg (2mg/mL)的IgG或其他蛋白质。

试剂盒特点

（1）操作简单，可在约一小时完成蛋白标记和纯化

（2）优化的F/P值

（3）无需称量微量粉末；试剂盒包含一次性试剂管

（4）高效的纯化试剂盒包括纯化树脂和离心柱，确保快速有效地去除未反应的染料并拥有优异的蛋白质回收率

应用

标记抗体或者含有伯胺的蛋白质、多肽。

保存条件

FITC需要-20℃避光保存；标记缓冲液和纯化凝胶(50%)于2-8℃保存；离心型纯化柱和2mL离心管于常温保存。自生产之日起12个月有效。

运输条件

湿冰运输。

FITC相关参数

注意事项

1. FITC对湿度敏感。即用即配FITC标记试剂，并丢弃未使用的部分。
2. 低浓度的叠氮化钠（≤3mM或0.02％）或硫柳汞（≤0.02mM或0.01％）不会显著干扰蛋白质标记；但是，20-50％的甘油会降低标记效率。
3. 避免使用含伯胺的缓冲液（例如：Tris、甘氨酸），因为它们与标记反应物竞争。

实验数据展示

1.美仑FITC标记结果与进口品牌对比

 图1. 美仑与进口品牌FITC标记抗体流程及结果对比

美仑标记的FITC-IgG的F/P=2.4，好于进口品牌（0.189），并且在规定范围内，蛋白收率与进口品牌相当。

2.用于流式检测

图2. 本组数据分别采用商业化荧光二抗、进口品牌和美仑荧光标记试剂盒制作的FITC-IgG（羊抗鼠），用于免疫荧光流式检测Hela细胞GAPDH

由图可知，美仑与进口品牌试剂盒相比，FITC-IgG二抗背景荧光几乎相同，都在正常范围以内，但美仑实验组的检测效果更好，而且所用抗体量也最少。相同实验处理条件下，美仑的检出阳性率可达93.64%，与商业化荧光二抗检测出的阳性率相近（96.53%），说明美仑荧光标记试剂盒纯化得到的荧光二抗可以媲美商业化抗体，可以用于标记实验。

3.用于细胞爬片免疫荧光镜检

图3. A549-GAPDH细胞爬片免疫荧光镜检：采用美仑试剂盒进行标记的FITC-IgG(goat anti-rabbit)荧光二抗，荧光显微镜40倍物镜拍摄。绿色荧光表示荧光标记的GAPDH，蓝色荧光代表细胞核。

4.美仑FITC-标记BSA独立重复实验测试

图4. FITC标记BSA独立重复实验

FITC-BSA测得的参数进行对比，可以看出重复性非常好，F/P值以及蛋白浓度近乎一致。