碱性磷酸酶显色试剂盒BCIP/NBT

产品描述

本试剂盒应用于胚胎干细胞（ES）和诱导多功能干细胞（iPS）的鉴定，以及免疫组化、免疫印迹等实验中的碱性磷酸酶显色。试剂盒内的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐（BCIP）/硝基四氮唑蓝（NBT）是碱性磷酸酶（AP）的常用底物之一，BCIP在AP的催化下会被水解生成强反应性产物，后者与硝基四氮唑蓝（NBT）反应生成不溶性产物，使之呈现深蓝色至蓝紫色。

操作指南:

1. AP显色工作液的配制：
   取20μl 150×NBT溶液加入到3ml碱性磷酸酶显色反应缓冲液，充分混合均匀，再加入30μl 100×BCIP溶液，配置成工作液，如需改变工作液体积，可按相同比例适量配制。1h内使用。
2. 显色步骤:
   1. 检测细胞的内源性碱性磷酸酶：吸出培养基，PBS润洗3次，加入4％多聚甲醛固定1-2min。吸出固定液，使用TBST清洗三次，加入显色工作液，室温避光孵育5-30分钟，显色至预期深浅后，用PBS润洗1次，然后保存于PBS溶液中，显微镜下观察结果。
   2. 检测组织切片或膜上结合的碱性磷酸酶抗体：使用洗涤液洗涤完后，加入适量工作液，保证完全覆盖样品表面，室温避光孵育5-30分钟，显色至预期深浅后，去除工作液，用蒸馏水清洗1-2次终止显色反应。

   注意事项:

   • BCIP和NBT对人体有刺激性，请注意适当防护。
   • 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

2-8℃保存，100×BCIP溶液和150×NBT溶液需避光保存，一年有效。