产品描述
细胞凋亡(Apoptosis)的一个显著特点是细胞染色体DNA的降解,在一些内源性核酸内切酶的作用下,核小体间的DNA被切断,从而产生不同长度的寡聚核小体片段,表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现特异的180-200 bp DNA Ladder图谱,而坏死细胞的DNA呈弥漫的连续图谱。
美仑一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)采用TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick End Labeling)方法,其原理为:末端脱氧核糖核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)在凋亡细胞断裂DNA的3´-羟基(3´-OH)末端催化掺入四甲基罗丹明-脱氧三磷酸尿苷(TRITC-dUTP)。TRITC-dUTP标记的DNA可以用荧光显微镜直接观察或者用流式细胞仪定量检测。
本试剂盒灵敏度高、特异性强、使用方便快捷。对于经过固定和洗涤的组织样本(石蜡切片、冰冻切片)和细胞样本(贴壁细胞、悬浮细胞),只需经过一步染色,洗涤后便可以进行凋亡检测。本试剂盒还提供了DNase I阳性对照和Proteinase K,以便操作。以50μL加样量为标准,MA0224-1可测定20次,MA0224-2可测定50次。
产品优势
★ 使用方便快捷,对于经过固定和洗涤的组织样本(石蜡切片、冰冻切片)和细胞样本(贴壁细胞、悬浮细胞),只需经过一步染色,洗涤后便可以进行凋亡检测。
★ 本试剂盒还提供了DNase I阳性对照和Proteinase K,以便操作。
★ 灵敏度高、特异性强、检测效果好。
数据展示
对照实验:采用某国内知名品牌TUNEL检测试剂盒作为对照,在相同的实验条件下,用Apoptosis Activator 2处理Hela细胞,荧光显微镜观察细胞凋亡后的荧光染色情况。
检测结果:如图1所示,美仑一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒灵敏度明显更高,染色效果更好。

图1. 使用美仑TUNEL细胞凋亡检测试剂盒与其他品牌检测效果的比较
保存条件
-20℃避光保存,自生产之日起12个月有效。
操作方法
请参考说明书。
注意事项
1.配制TUNEL检测液之后的步骤注意避光操作。
2.若配制TUNEL检测液操作时间较长,请将TdT Enzyme (10×)、TRITC-dUTP Labeling Mix和配好的检测液置于冰上暂时保存。
3.需自备PBS或HBSS,抗荧光衰减封片剂(美仑货号:MA0235或MA0236-含DAPI),组织固定液(美仑货号:MA0192)或4%多聚甲醛,Triton X-100,二甲苯,无水乙醇等。
4.PBS或HBSS清洗后,为了各种反应的有效进行,请尽量除去PBS或HBSS溶液后再进行下一步反应。
5.结果分析时注意:在坏死的晚期阶段或在高度增殖/代谢的组织细胞中可产生大量DNA片断,从而引起假阳性结果;而有些类型的凋亡性细胞死亡缺乏DNA断裂或DNA裂解不完全,以及细胞外的矩阵成分阻止TdT进入胞内反应,进而产生假阴性结果。
6.为了您的安全和健康,操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
细胞凋亡进程及检测产品选择指南:
| 细胞凋亡阶段 | 凋亡变化 | Meilunbio检测产品 |
| 早期 | Ca2+水平增高 | Ca2+指示剂,如Fluo-2/4 AM |
| 早中期 | 线粒体膜电位下降 | JC-1检测试剂盒 |
| 磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)外翻 | AnnexinV系列 | |
| Caspase被激活 | Caspase-3/7活性检测试剂盒 | |
| 早晚期 | 细胞核染色质变化 | 细胞核染料,如DAPI、PI等 |
| 晚期 | DNA片段化 | TUNEL系列 |
| 细胞凋亡进程 | 双链DNA变化 | 细胞周期检测试剂盒 |
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关键词
TUNEL原位细胞凋亡

