Firefly-Glo萤光素酶报告基因检测试剂盒

产品简介：

FIREFLYGLO萤光素酶报告基因检测系统是一种辉光型定量检测试剂盒，具有高灵敏度和发光信号稳定的特点，可以满足高通量检测萤光素酶在哺乳动物细胞中的表达。相对于美仑闪光型Firefly Luciferase Reporter Assay Kit（MA0517），本品FIREFLYGLO Luciferase Reporter Assay Kit（MA0519）具有以下优点：采用了一种全新的萤光素酶检测底物，提高了发光信号的稳定性，近乎2小时的信号半衰期为实验设计提供了更大的灵活性；采用加样-混匀-检测的操作方法，无需依赖自动进样器，并且无需弃培养液、离心等步骤，简化了实验流程；本试剂盒组分做了大量优化，与传统闪光型产品相比，无明显刺激性气味。FIREFLYGLO萤光素酶报告基因检测试剂盒可用于多种常用细胞培养液：RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等，其半衰期均为2小时左右（22℃），满足绝大多数高通量实验需求。

使用说明：

1. 自备材料
   • PBS；多道排枪；白色不透光细胞培养板；化学发光仪或酶标仪。
2. 检测前准备
   1. 首次使用时将FIREFLYGLO Luciferase Reaction Buffer一次性全部倒入FIREFLYGLO Luciferase Substrate瓶中，充分混匀后，按使用需求进行分装，建议-70℃长期保存或者短期存放于-20℃不超过一个月，并尽快使用。
   2. 每次实验前将分装后冻存的检测试剂平衡至室温。
3. 操作方法
   1. 从细胞培养箱中取出细胞培养板，放置5-15min，恢复至室温。
      注：使用白色不透光的细胞培养板，减少孔间的信号干扰。
   2. 加入检测溶液
      使用多道排枪向每个细胞孔中加入平衡至室温的含有底物的FIREFLYGLO Luciferase Reaction Buffer，加样体积与细胞培养液体积相同。例如，96孔板通常加入80-100ul培养液，相应加入80ul-100ul检测溶液；384孔板通常加入20-30ul培养液，相应加入20-30ul检测溶液。
   3. 振荡混匀
      为了使得细胞裂解充分，建议将细胞培养板放在振荡混匀仪或附带振板功能的仪器上，室温条件下，采用中高速振板5-10min。
      注：建议振板混匀时间为5-10min，可根据细胞量进行适当调整，确保细胞充分裂解，得到稳定的发光检测结果。
   4. 检测
      振板混匀后于化学发光仪或酶标仪中检测Firefly Luciferase报告基因活性。
      注：为得到最佳检测结果，请在加入检测试剂后2小时内完成检测。

注意事项：

1. 检测仪器选择：能够检测化学发光的仪器都适用本试剂盒的检测，但是针对相同的样品，不同检测器本底信号值和测量值均可能不同；且对于同一样本检测，不同仪器的数值不可横向比较。为防止孔间干扰，推荐使用不透明白色细胞培养板。
2. 由于发光信号会受到检测环境如培养基组分、温度等影响，所以应确保同组内不同样本检测条件一致。
3. 酶促反应对温度较为敏感，加样检测前务必将检测试剂以及细胞培养板平衡至室温。
4. 为保证萤光素酶检测试剂稳定性，适量分装后建议-70℃长期避光保存或者短期存放于-20℃不超过一个月，并尽快使用，尽量避免多次反复冻融。
5. 如需同时检测多个细胞培养板，请尽量确保每个细胞板加入检测溶液后孵育时间一致，再进行数据读取，以此获得最佳的检测结果。

保存条件：

• 全新试剂盒-20℃保存，一年有效；
• 溶解分装后的FIREFLYGLO Luciferase Substrate于-70℃避光保存一年，或-20℃短期保存不超过一个月。

数据展示图1.FIREFLYGLO发光体系在光强、稳定性以及线性效果对比P进口品牌。(A) 萤光素酶浓度-光强-时间标曲三维图。在一定浓度范围内，标准曲线统计显示为一个截面，说明meilunbio的FIREFLYGLO发光体系在2h以内任一时刻的线性良好。(B) meilunbio的FIREFLYGLO萤光素酶报告基因检测试剂盒对比P进口公司最新版本，在绝对光强和稳定性方面非常接近。(C) 单一时刻光强-Firefly萤光素酶浓度标曲线性良好（R2=0.9994）。

图2.FIREFLYGLO发光体系在不同培养基发光及半衰期验证。美仑FIREFLYGLO发光体系在常用培养基如：DMEM、RPMI1640、DMEM/F12、MEMα、F12等都可以正常发光；萤光半衰期在100-120min 左右，与P进口品牌官方公布的数据相当（此处未完全展示，可参考P公司官方网页）。

图3. 酚红浓度-FIREFLYGLO萤光稳定性验证。配制含有浓度梯度的PBS溶液，各自加入等量的萤火虫萤光素酶并验证FIREFLYGLO 的发光稳定性。由图可知，meilunbio® FIREFLYGLO 对比P进口品牌具有更好的酚红耐受能力。

图4. (A)细胞浓度梯度光强稳定性和(B)细胞浓度-光强标曲示例。在细胞培养基环境中，原位追踪检测Firefly Luciferase发光情况。由图可知，萤光稳定性和绝对光强与P进口品牌差异不大；而且，单一时刻光强-细胞数标曲线性良好（R2=0.9993）。

图5.293T细胞中TNFα 浓度梯度诱导NF-κB通路检测效果美仑对比P进口品牌。(A) 归一化处理后，由图可知TNFα浓度梯度在2h以内各个时刻均保持着相对一致的诱导关系；并且随着时间进行，这种诱导关系并无明显变化。(B) 单一时刻TNFα 浓度梯度诱导NF-κB通路效果美仑对比P进口品牌，结果无显著性差异。