Nano-Light萤光素酶报告基因检测试剂盒

¥900.00¥4,500.00

产品内容:

产品组成

100T

1000T

NANOLIGHT Luciferase Reaction Buffer

10ml

100ml

NANOLIGHT Luciferase Substrate(50x)

200μl

1ml x 2

说明书

1份

1份

产品简介:
NANOLIGHT萤光素酶报告基因检测系统是一种辉光型定量检测试剂盒,具有高灵敏度和发光信号稳定的特点,符合高通量检测的需求。NANOLIGHT萤光素酶是一个经过基因工程改造的小分子酶(19.1kDa),是性能卓越的生物发光报告基因。它使用一种新型底物Furimazine,可产生高强度、辉光型发光。信号强度是萤火虫以及海肾萤光素酶的150倍;超强信号稳定性,半衰期可达2小时。NANOLIGHT萤光素酶的生物发光反应不依赖ATP,自发光背景低,光信号更亮,同时抑制背景发光以获得最高检测灵敏度。
反应原理如下:

使用说明:

1.自备材料
PBS;多道排枪;白色不透光细胞培养板;化学发光仪或酶标仪。
2.检测前准备
1)预先将NANOLIGHT Luciferase Reaction Buffer放置于室温融化。
2)取出NANOLIGHT Luciferase Substrate(50x),每次开盖前需进行短暂低速离心。
3)根据实际使用量,以50:1的比例将适量的NANOLIGHT Luciferase Reaction Buffer与NANOLIGHT Luciferase Substrate(50x)混匀,室温避光备用。例如:如果需要100ml反应液,则需要加入2ml的检测底物。
注:建议现配现用,剩余的含有Furimazine底物的反应液在当次实验结束后,直接舍弃,不要留存。
3.操作方法
1)从细胞培养箱中取出细胞培养板,放置5-15min,恢复至室温。
注:使用白色不透光的细胞培养板,减少孔间的信号干扰。
2)加入检测溶液
使用多道排枪向每个细胞孔中加入平衡至室温的含有底物的NANOLIGHT Luciferase Reaction Buffer,加样体积与细胞培养液体积相同并混匀。例如,96孔板通常加入80-100ul培养液,相应加入80ul-100ul检测溶液;384孔板通常加入20-30ul培养液,相应加入20-30ul检测溶液。
3)孵育
室温下孵育5-10min。为了使得细胞裂解充分,也可将细胞培养板放在振荡混匀仪或附带振板功能的仪器上,室温条件下,采用中高速振板5-10min。
注:孵育时间,可根据细胞量进行适当调整,确保细胞充分裂解,得到稳定的发光检测结果。
4)检测
混匀后于化学发光仪或酶标仪中检测NANOLIGHTLuciferase报告基因活性。
注:为得到最佳检测结果,请在加入检测试剂后2小时内完成检测。

注意事项:
1.检测仪器选择:能够检测化学发光的仪器都适用本试剂盒的检测,但是针对相同的样品,不同检测器本底信号值和测量值均可能不同;且对于同一样本检测,不同仪器的数值不可横向比较。为防止孔间干扰,推荐使用不透明白色细胞培养板。
2.由于发光信号会受到检测环境如培养基组分、温度等影响,所以应确保同组内不同样本检测条件一致。
3.酶促反应对温度较为敏感,加样检测前务必将检测试剂以及细胞培养板平衡至室温。
4.如需同时检测多个细胞培养板,请尽量确保每个细胞板加入检测溶液后孵育时间一致,再进行数据读取,以此获得最佳的检测结果。
5.NANOLIGHT萤光素酶具有超强信号稳定性,半衰期可达2小时。但是当酶表达量过高时,信号半衰期会缩短,建议优化实验设计方案(如减少质粒转染量),避免萤光素酶表达量过高。

保存条件:
全新试剂盒-20℃保存,一年有效。

短期运输条件:
避光冷藏


数据展示

图1.NANOLIGHT萤光素酶光强、稳定性及萤光线性对比P进口品牌。美仑NANOLIGHT 单酶报告基因试剂盒体外NANOLIGHT酶活检测中,绝对光强和稳定性都已经十分接近对比P进口品牌,并且NANOLIGHT萤光线性良好(R2=0.999)。

图2.细胞培养体系下验证光强稳定性及细胞密度-光强标曲。在细胞培养基环境中,原位检测发光状况,可以看出美仑组的稳定性和绝对光强与P进口品牌差异不大,而且,细胞密度-光强标曲线性很好(R2=0.999)。

图3.TNFα梯度诱导293T细胞的NF-κB通路对比P进口品牌。美仑NANOLIGHT萤光素酶报告基因检测试剂盒得到的结果与P进口品牌一致性保持良好。

图4. NANOLIGHT酚红耐受及不同培养基中发光验证。配制含有浓度梯度的酚红PBS溶液,每孔加入等量的NANOLIGHT萤光素酶和发光反应液,验证NANOLIGHT的发光稳定性。由图可知,meilunbio® NANOLIGHT对比P进口品牌具有更好的酚红耐受能力。此外,NANOLIGHT在常见培养基里发光水平波动不大(图中以RPMI-1640归一化处理)。

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规格

1000T, 100T

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