产品简介
One Step Mouse Tissue Direct PCR Kit(一步法小鼠组织直接扩增试剂盒)包含DNA粗提及PCR扩增体系,可直接快速地对小鼠组织(如鼠尾、鼠耳、鼠趾等)样本进行PCR扩增,用于基因型鉴定,无需过夜消化、酚氯仿抽提或柱式纯化等操作,极大缩短实验耗时。产品适用于2 kb以内目的片段的扩增以及3对引物以内的多重PCR反应。
本产品组分2×Mouse Tissue Direct PCR Mix中,包含经过基因工程改造的DNA聚合酶、Mg2+、dNTPs及优化的缓冲体系,具有极高的扩增效率和抑制物耐受度,使用时只需加入模板、引物和水即可进行PCR扩增,操作简便。
本产品适用于小鼠基因敲除分析、转基因鉴定、基因分型等,扩增产物3’端带A(粘性末端),可直接用于TA克隆。
产品优势
- 省时:裂解产物直接用于PCR扩增,无需进行费时而昂贵的基因组提取;
- 适用性广:适用于多种小鼠组织(如鼠尾、鼠耳、鼠趾等)的直接扩增;
- 操作便捷:本试剂盒中PCR酶为预混液,加入引物和模板即可进行扩增;PCR产物含有染料可直接进行电泳。
数据展示
- 不同物种来源模板扩增效果
方法:分别以小鼠尾巴、趾甲、耳朵为样本,使用One Step Mouse Tissue Direct PCR Kit直接裂解后扩增8个片段,PCR反应结束后进行核酸电泳检测。
结果:如图1 所示,MA2001对小鼠不同的组织如尾巴、趾甲、耳朵均可以进行高效扩增,扩增效果无明显差异,样品兼容广。
图1. One Step Mouse Tissue Direct PCR Kit对不同物种来源模板扩增效果
保存条件
Lysis Buffer 2~8℃保存,其余组分-20℃保存。自生产之日起24个月有效。
运输条件
湿冰运输。
注意事项
1、为了避免样品间出现交叉污染,需准备多个取样工具,如需反复使用可在每次取样后用2%次氯酸钠溶液或核酸清洗液(美仑货号MMT069)对工具表面进行清洁。
2、建议使用新鲜采取的小鼠组织,取样量不宜过大,以免影响扩增结果。
3、Lysis Buffer的保存条件为2~8℃,若低温储存(≤0℃)可能会出现沉淀,在使用前请务必充分溶解。
4、2×Mouse Tissue Direct PCR Mix应避免反复冻融,短期内多次使用可置于2~8℃保存。
5、本产品仅适用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
常见问题与解答
问题 | 可能原因 | 建议 |
扩增无产物或产物量少 | 裂解产物过量 | 选择最合适的模板用量,一般不超过体系的1/10 |
DNA释放效率较差 | 可尝试延长裂解液与样本孵育时间 | |
Proteinase K没有充分灭活 | 灭活步骤可在沸水浴中进行 | |
PCR引物质量较差 | 使用基因组DNA进行扩增验证引物质量,优化引物设计 | |
非特异性扩增 | 引物特异性差 | 优化引物,避免非特异性条带以及引物二聚体的扩增 |
模板浓度过高 | 减少模板用量或将模板稀释10倍后扩增 | |
退火温度过低 | 尝试提高退火温度并设置退火温度梯度 | |
反应体系配制时温度高 | 建议在冰上配制PCR反应体系 |
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