产品简介
2×qPCR SYBR Green Master Mix(Universal)是使用SYBR Green I嵌合荧光法进行实时定量 PCR (qPCR) 扩增的2×专用预混液。其核心组分是一种抗体修饰的新型热启动DNA聚合酶，可以有效抑制低温下的非特异性扩增，提高了反应特异性和扩增效率。同时配方中添加了针对qPCR优化的最适Buffer以及特异性促进因子，使定量 PCR 可以在宽的定量区域内获得良好的线性关系。此外，本产品中含有独特的校正染料，与一系列qPCR仪器兼容，实验过程中无需额外添加染料来校正仪器。
本产品适用于DNA样本（基因组DNA、cDNA、质粒DNA、λDNA等）的扩增定量。
产品优势
- 高特异性：采用抗体法热启动及最佳适配buffer，极大程度减少二聚体的生成；
- 高灵敏度：在宽广的模板区间具有优异的线性关系；
- 适用性广：适用于多种qPCR仪器，无需调整ROX浓度；
- 操作简便：本产品为2×预混液，只需加入模板、引物和水即可进行反应。
数据展示
- 模板梯度浓度扩增效果
方法：分别将小鼠cDNA进行7个梯度的10倍稀释，使用2×qPCR SYBR Green Master Mix(Universal)进行qPCR扩增，再根据结果做模版梯度浓度-CT标准曲线。
结果：如图1 所示，MA2004在宽广的模板量区间内具有优秀的线性关系。
图1. 2×qPCR SYBR Green Master Mix对梯度浓度模板扩增效果
- 不同物种模板扩增效果
方法：分别以玉米、小鼠、293T细胞cDNA为模板，使用2×qPCR SYBR Green Master Mix及市售同类型产品Product A和Product B同时检测6个基因，再进行定量分析。
结果：如图2 所示，MA2004具有较高的扩增效率。
图2. 2×qPCR SYBR Green Master Mix对不同物种模板扩增效果
保存条件
-20℃避光保存，自生产之日起12个月有效。
运输条件
湿冰运输。
注意事项
1、qPCR引物设计建议：引物长度推荐在25 bp左右、Tm值60℃~65℃，GC含量控制在50%左右，3’端最后一个碱基最好为G或C，比对引物避免3’端或引物间有非特异性互补。
2、本产品解冻后可能会出现絮状或白色沉淀，请室温下放置片刻并上下轻轻颠倒至溶液澄清，不影响试剂性能。
3、本产品尽量避免反复冻融，以免酶活下降；可在首次解冻后分装保存。
4、本产品中含有荧光染料SYBR Green I，需避光保存，使用过程中尽量避免强光照射。
5、本产品在使用前需上下颠倒混匀；使用过程中一定要避免产生气泡，可短暂离心消除，排除气泡对结果造成影响。
6、本产品检测灵敏度极高，容易被环境中气溶胶污染，因此配制反应体系时请在超净工作台内进行，配制过程中推荐使用专用的移液枪和带滤芯的枪头；配制体系前可以使用核酸清洗液（美仑货号：MMT069）对实验台面及操作环境进行清洁。
7、为不影响后续实验，建议做预实验检查引物有效性和特异性。
8、本产品仅适用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
9、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
常见问题与解答
| 问题 | 可能原因 | 建议 |
| 无Ct值出现 | 程序设置有误 | 需检查程序设置：两步法扩增在退火延伸步骤采集信号，三步法扩增在延伸阶段采集信号 |
| 引物或模板降解 | 建议用PAGE电泳检测引物完整性，琼脂糖凝胶电泳检测模板DNA或RNA的质量及完整性，RNA模板建议重新逆转录获得cDNA，且尽快使用 | |
| 模板用量不足 | 适当增加模板用量或重新制备高浓度模板 | |
| 实验重复性差 | 加样操作存在误差 | 建议使用性能较好的移液枪，配制预混液后分装，减少移液误差 |
| 模板浓度低或拷贝数低 | 适当增加模板用量 | |
| 荧光定量PCR仪器不同位置温度控制不一致 | 定期校准仪器 | |
| 扩增曲线形状异常 | 扩增曲线不光滑 | 信号太弱，经系统校正后产生，可提高模板浓度重复实验 |
| 扩增曲线断裂、骤降 | 模板浓度较高导致基线的终点值大于Ct值，可以减小基线终点(Ct值-4)，重新分析数据；或反应管内留有气泡，建议上机前离心并仔细检查反应管内是否有气泡残留 |
相关产品
| MA2007 | 植物总RNA提取试剂盒（离心柱型） | 5T |
| MA2008 | 快速动物组织总RNA提取试剂盒（双离心柱型） | 5T |