DTSP;DSP,3,3′-二硫代二丙酸二(N-羟基丁二酰亚胺酯)

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CAS 号:57757-57-0
英文名字:3,3′-Dithiodipropionic acid di(N-hydroxysuccinimide ester)
质量标准:>97%,BR
货号: MB0027

DTSP;3,3′-二硫代二丙酸;N-羟基丁二酰亚胺酯;
3,3′-Dithiodipropionic acid di(N-hydroxysuccinimide ester)
分子式:C14H16N2O8S2分子量:404.41

简介:DTSP是一类小分子化合物,具有2个或者更多的针对特殊基团(氨基、巯基等)的反应性末端,可以和2个或者更多的分子分别偶联从而使这些分子结合在一起。在生命科学研究中,巧妙地运用交联剂可以使很多工作取得突破。已经被广泛地应用于:细胞膜结构研究,蛋白质结构研究,蛋白质间相互作用研究,生物导弹研究,载体蛋白与半抗原的连接,蛋白质或其他分子的固相化,抗体的标记,标记转移,蛋白质与核酸的连接。

别名:3,3′-二硫代二丙酸二(N-琥珀酰亚胺)酯;3,3′-Dithiodipropionic Acid Bis(N-succinimidyl Ester);3,3′-Dithiodipropionic Acid Di(N-succinimidyl Ester);DTSP
物理性状及指标:
外观:…………………………白色粉末
溶解性: ……………………..氯仿:50 mg/mL;溶于DMSO、DMF、丙酮
含量:……………………..…. >97%
熔点:……………………..….128-133 °C
沸点:…………………………560.1ºC
密度:…………………………1.57g/cm3
储存条件:2-8℃,避光防潮密闭干燥

运输条件:常温运输

用途及描述:科研试剂,广泛应用于分子生物学,药理学等科研方面,严禁用于人体。 用于蛋白交联与修饰。DTSP是不溶于水的同型双功能的N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS-酯)。DTSSP是其水溶性类似物。这些交联剂是硫醇可裂解的,与伯胺反应的并且已经用于很多应用中。NHS-酯能够与伯氨基(-NH2)有效反应形成稳定的酰胺键,释放N-羟基琥珀酰亚胺。DTSP是非磺化的,因此是疏水性的,而DTSSP是磺化的和水溶性的。需要将DTSP先溶解在有机溶剂中再加入到水相反应混合物中。因为DTSP没有具有带电荷的基团,所有是亲脂性和可渗透膜的,能够用于细胞内和膜内蛋白质的共轭反应。DTSSP则可以直接添加到水相中,用于交联细胞表面蛋白质。
经典实验操作(仅供参考)

  1. 在溶液中交联蛋白的方法:

1. 所需材料
1) 交联剂溶液:将DTSP溶于无水DMSO中,10~25 mM。DTSSP可溶于水,缓冲液或直接加入样品。或在pH 5.0,5 mM柠檬酸钠缓冲液中制备DTSSP,并逐滴加入到反应混合物中。丢弃任何未使用的重构交联剂。
2) 反应缓冲液:磷酸盐缓冲液,HEPES,pH 7~9 的碳酸氢盐/碳酸盐或硼酸盐缓冲液。避免含有伯胺的缓冲液,因为胺将与交联反应竞争。
2. 步骤:
1) 用反应缓冲液配制蛋白质溶液。 如果样品溶液含有Tris或甘氨酸,则需在反应缓冲液进行深度透析。
2) 向蛋白质样品中加入所需的交联剂。如果蛋白质浓度大于5 mg/ml,则使用10倍摩尔过量的交联剂;若样品小于5 mg/ml,使用20~50倍摩尔过量的交联剂。建议使用的交联剂终浓度为0.25~5 mM。
3) 将反应混合物在室温下孵育30分钟或在冰上孵育2小时。
4) 加入20~50 mM 的胺溶液(如Tris或甘氨酸)淬灭反应,孵育15分钟。

  1. 细胞内和细胞外交联的方法:

DTSSP用于细胞表面蛋白交联,因为它是不渗透膜的。DTSP渗透膜,用于细胞内蛋白交联。
1. 所需材料
1) 交联剂溶液:反应前将 DTSP 溶于无水DMSO中。DTSSP可溶于水/缓冲液或直接加入样品。或在pH 5.0,5 mM柠檬酸钠缓冲液中制备DTSSP,并逐滴加入到反应混合物中。丢弃任何未使用的重构交联剂。
2) 反应缓冲液:磷酸盐缓冲液,HEPES,pH 7~9的碳酸氢盐/碳酸盐或硼酸盐缓冲液。避免含有伯胺的缓冲液,因为胺将与交联反应竞争。
3) 淬灭溶液:1 M Tris,pH 7.5(Tris或甘氨酸可用于淬灭反应)。
2. 步骤:
1) 用反应缓冲液洗涤细胞两次以除去含胺的培养基。
2) 对于细胞表面相互作用研究,向细胞中加入配体并在4°C下孵育1小时。
3) 加入交联剂溶液至最终浓度为1~2 mM。
4) 将反应混合物在室温下孵育30分钟或在冰上孵育2小时。
5) 加入10~20 mM淬灭缓冲液淬灭反应,孵育15分钟。
注意事项:
1. DTSP对湿度敏感,在2~8°C干燥保存。为了避免产品中的水分冷凝,开瓶前必须先平衡至室温。(平衡可能需要30分钟)。
2. NHS-酯部分易水解并无活性,因此不要制备用于储存的储备溶液,实验前配制,弃掉所有重构交联剂。
3. NHS-酯的水解是酰化反应的主要竞争反应。水解速度会随着pH的增加而加快,并且在稀释的蛋白质或肽溶液中更容易发生。
4. 显示生物活性的蛋白质(即酶,抗体等)可能在交联时失去活性,这可能是交联时蛋白质分子的构象变化引起的。当交联剂修饰参与结合底物和抗原的赖氨酸基团时,也可能使活性丧失。
5. 切割DTSP可以在37°C下用10~50 mM DTT 孵育30分钟或在100°C下,在SDS-PAGE上样缓冲液(2%SDS,6.25 mM Tris,10%甘油)中加入5% β-巯基乙醇,孵育5分钟。
6. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
【注意】
●我司产品为非无菌包装,若用于细胞培养,请提前做预处理,除去热原细菌,否则会导致染菌。
●部分产品我司仅能提供部分信息,我司不保证所提供信息的权威性,以上数据仅供参考交流研究之用。

我司所售出产品仅供于科研研究用途(非临床科研研究),每次销售产品行为都适用于我司网上所列明的通用销售条款

规格

100mg, 1g, 5g

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