抗氧化剂肽段A

抗氧化剂肽段B

Assign value

Acidic amino acid

Asp (D), Glu (E), and the C-terminal -COOH.

-1

Basic amino acid

Arg (R), Lys (K), His (H), and the N-terminal -NH2

+1

Neutral amino acid

Gly (G), Ala (A), Leu (L), Ile (I), Val (V), Cys (C), Met (M), Thr (T), Ser (S), Phe (F), Tyr (Y), Trp (W), Pro (P), Asn (N), Gln (Q)

0

详细说明

Negative (<0)

1.试着先把肽溶解在水中。
2.如果水不通，加入NH4OH(<50μL)。
3.如果肽仍然不溶解，加入DMSO（50-100μL）溶解肽。

Positive (>0)

1.试着先把肽溶解在水中。
2.如果水不行，试着将肽溶解在10%-30%的乙酸溶液中。
3.如果肽仍然不溶解，试着将肽溶解在少量DMSO中。

Zero (=0)

1.先尝试将肽溶解在有机溶剂（乙腈、甲醇等）中。
2.对于非常疏水的肽，试着将肽溶解在少量DMSO中，然后用水稀释溶液至所需浓度。

• Y79细胞接种于含1000μL培养基的12孔板中，2×105个细胞/孔，37℃孵育过夜。然后将细胞暴露于不同剂量的抗氧化肽A(Pep-A)和PPep-B(10,50和100μM)的新鲜培养基中，然后培养6小时。培养结束时，收集细胞并用冰冷的PBS洗涤两次，并用细胞溶解缓冲液[0.1M Tris/HCl，pH 7.4，含0.5%Triton X-100，5mMβ-巯基]溶解。乙醇，0.1mg/mL PMSF]。细胞裂解液在14000×g下于4℃离心5分钟，上清液含有来自细胞质和线粒体的复合SOD活性。用超氧化物歧化酶（SOD）活性测定试剂盒测定SOD活性。简言之，将细胞裂解物、缓冲液、酶和WST试剂稀释，并按照方案加入溶液，在37℃下孵育20分钟，在微板阅读器上在450nm下阅读。然后将SOD活性计算为黄嘌呤氧化酶的抑制活性的百分比。

细胞实验

• Y79视网膜母细胞瘤和MIMM1细胞在5×103细胞/孔接种于96孔板中，37℃孵育过夜。然后在新鲜培养基中用不同浓度（10、30、60和100ΩM）的抗氧化肽A（Pep-A）和PPep-B处理细胞，并培养特定时间段（24和48小时）。在培养结束时，将10 LMTT（5mg/mL）加入新鲜培养基（100 L）的细胞中，在37℃孵育，直到形成甲醛晶体。将甲醛晶体溶解在100LDMSO中，在570nm处进行读数。计算细胞存活率。