分子量：37KD
简介：凝血酶(Thrombin)来源于牛血浆，分子量37KD，是由两条肽链(31KD和6KD)通过二硫键组成的。凝血酶是凝血酶原（凝血因子Ⅱ）激活后形成的蛋白质水解酶，其催化纤维蛋白原(Fibrinogen)水解掉A肽和B肽，由此形成纤维蛋白单体，单体进一步聚合，在血小板、红细胞和白细胞等参与下形成血凝块。
别名：Thrombin from bovine plasma
物理性质和指标：
外观：……………………白色冻干粉或块状物
溶解性：…………………生理盐水
pH：………………………5.0-6.0
比活力：…………………≥2000 U/mg
纯度：……………………SDS-PAGE检测图谱无杂蛋白条带
效价：……………………不低于标示效价的85%
储存条件：2-8℃，避光防潮密闭干燥
运输条件：湿冰运输（按季节）
产品特点：
- 纯度高：SDS-PAGE检测图谱无杂蛋白条带。
- 比活高：比活力大于2000U/mg；可以媲美进口产品。
- 不含有其他蛋白酶活性。
- 灭活病毒：生产过程中采用S/D法和干热法两步灭活病毒。
- 性价比突出：尤其对于工业客户，国内产品的价格，国际顶尖产品质量。
使用说明：（来源文献，仅供参考）
(一)储液配制
储备溶液可在生理盐水中以100单位/mL的浓度制备。由于凝血酶溶液易吸附到玻璃上，因此建议将溶液等份放入塑料管中，并在-20°C下储存，以便长期储存。
(二)融合蛋白切割
- 凝血酶对不同的融合蛋白切割效率不一样，建议先进行小量酶切试验。比如固定融合蛋白10 μg，凝血酶设置梯度添加量（如0.1 U, 0.2 U, 0.5 U, 1 U 等），温度梯度（如4℃，25℃，37℃等），以及时间梯度（0.3到16小时）进行试验。建议摸索好最佳条件后再进行扩大酶切实验。
- 凝血酶切割融合蛋白可以在1:500~1:2000比率下进行。
- 融合蛋白可以在由20 mM Tris，pH 8.0，150 mM NaCl，2.5 mM CaCl2和0.1％2-巯基乙醇组成的凝血酶切割缓冲液中被切割。
- 例如：将2 mg融合蛋白与4 µg凝血酶在裂解缓冲液中室温孵育20分钟。
- 凝血酶最佳的切割位点是X4-X3-P-R[K]-X1′-X2′，这里X4和X3是疏水氨基酸，而X1′和X2′是非酸性氨基酸，一些经常使用的识别位点是L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和MY-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2′之间切割比在X4-X3-P-K-L-X2′更有效。其他识别位点是X2-R[K]-X1′，这里X2或者 X1′是甘氨酸，例如A-R-G和G-K-A，这里切割发生在第二个残基后。在凝血酶切割位点和N末端标签之间插入五个甘氨酸残基可改善切割，通过这一“甘氨酸连接肽”只需较少酶量就可达到完全切割，而且也可以避免可能发生的错误切割。
- 凝血酶可从切割产物中用p-氨基琼脂糖亲和纯化，或者用苯甲脒琼脂糖移去。
(三)血小板聚集试验
- 兔血用塑料管收集，用ACD(86 mmol/L柠檬酸钠，111 mmol/L葡萄糖，53 mmol/L柠檬酸)0.15体积比抗凝，200×g离心10 min，离心2次，取上清，800×g离心15 min。
- 沉淀中加Tyrode—Hepes缓冲液(140 mmol/L NaCl, 5 mmol/L KCl, 1 mmol/L MgCl2, 10 mmol/L Hepes, 10mmol/L葡萄糖，pH 7.4)调节至血小板数为(3～4)×10^11/L。
- 使用血液凝集仪进行测定。血小板悬液(0.2mL)与药物温育1 min，然后用凝血酶(500 U/L)作用5 min，记录聚集情况。
【注意】
- 溶解性是在室温下测定的，如果温度过低，可能会影响其溶解性。
- 我司产品为非无菌包装，若用于细胞培养，请提前做预处理，除去热原细菌，否则会导致染菌。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 部分产品我司仅能提供部分信息，我司不保证所提供信息的权威性，以上数据仅供参考交流研究之用。
参考文献：
- CHANG J. 1985. Thrombin specificity. Requirement for apolar amino acids adjacent to the thrombin cleavage site of polypeptide substrate. Eur J Biochem. 151(2):217-224.
- Hakes DJ, Dixon JE. 1992. New vectors for high level expression of recombinant proteins in bacteria. Analytical Biochemistry. 202(2):293-298.
- Guan K, Dixon JE. 1991. Eukaryotic proteins expressed in Escherichia coli: An improved thrombin cleavage and purification procedure of fusion proteins with glutathione S-transferase. Analytical Biochemistry. 192(2):262-267.
关键词
Thrombin (MW 37kDa)