产品简介:
TOP10超级感受态细胞,是一种可以用于高效质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒稳定复制的E.coli TOP10即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化,在严格按照使用说明进行操作时,转化效率可以达到1.0±0.5×109cfu/μg DNA。
TOP10菌株来源于MC1061菌株,是目前实验室最常用的菌株之一,广泛用于基因克隆、蓝白筛选、质粒稳定扩增等分子生物学实验。其生长速度较快(比DH5α快,但比Mach1-T1慢),10小时可见克隆。
TOP10表达Methyl coenzyme M reductase(mcrA),当转化产物为真核细胞来源的、甲基化的DNA分子时,可优先考虑。
TOP10菌株的基因型为F- mcrA Δ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG。该基因型与DH10B高度类似(DH10B为galE15型,而TOP10为galU型)。其中hsdR用于有效转化通过PCR扩增获得的未甲基化DNA;lacZΔM15的表达使TOP10感受态可用于蓝、白斑筛选;recA1可减少插入片段的同源重组概率,保证了插入DNA的稳定性;endA1的突变提高了质粒DNA的产量和质量;StrR使得该细胞具有硫酸链霉素抗性。
保存条件:-80ºC保存,一年内有效。避免反复冻融,通常制备6个月后转化效率随保存时间延长而逐渐降低。
运输条件:干冰运输。
注意事项:
– 感受态细胞禁止反复冻融,并应尽可能避免冻融,反复冻融会导致转化效率大幅下降。
– 感受态细胞融化后,须尽快加入待转化样品,不宜在无转化产物的情况下放置时间超过10分钟或以上时间,以免降低感受态细胞 的转化效率。
– 待转化样品的体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%,样品体积过大会导致转化效率下降。
– 感受态细胞对于温度变化非常敏感,需要避免出现不应有的使用说明之外的温度变化。
– 感受态细胞对于机械力非常敏感。加入待转化样品时应轻柔操作,不能使用移液枪吹打混匀。
– 通常仅建议取部分样品用于转化,这样万一遇到转化失败的情况,还留有样品可以再次进行转化。
– 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
– 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。