Rivaroxaban (BAY 59-7939)

产品描述

Rivaroxaban是一种Factor Xa的直接抑制剂，无细胞试验中Ki和IC50分别为0.4 nM和0.7 nM。Rivaroxaban对人源factor Xa具有高选择性，是对其他生物性相关的丝氨酸蛋白酶的选择性的10 000倍以上。

特性

Rivaroxaban是一种口服具有直接作用的 Factor Xa抑制剂。

靶点

Factor Xa (Cell-free assay)	Prothrombinase (Cell-free assay)
0.7 nM	2.1 nM

体外研究

Rivaroxaban是一种口服具有直接作用的Factor Xa (FXa)抑制剂，对于预防和治疗动静脉血栓生成有作用， Ki值0.4 nM, 同时还可以抑制凝血酶原酶活性IC50为2.1 nM. Rivaroxaban 对于纯化的人源和兔源的FXa 也有类似的亲和性 (IC50 分别为0.7 nM 和 0.8 nM), 但对于大鼠FXa 亲和性较差 (IC50 为3.4 nM)。在血浆中, Rivaroxaban 对人和兔内源FXa抑制效果相当 (IC50 均为21 nM),但在大鼠血浆中要达到同样的抑制效果需要提高14倍药物浓度 (IC50 290 nM)。 Rivaroxaban在Caco-2细胞中作为P-gp底物具有高渗透性和极化运输特性， 在体外直到100 μM仍然对于P-gp介导的药物运输没有影响。

体内研究

体内实验中, Rivaroxaban可以减少大鼠静脉瘀血模型的静脉血栓形成，这一作用具有剂量依赖特性 (ED50为0.1 mg/kg 静脉注射) 。Rivaroxaban 在大鼠和兔的动静脉分流模型中会减少动脉血栓形成， ED50 分别为5.0 mg/kg（口服）和 0.6 mg/kg (口服)。Rivaroxaban在研究剂量范围内(大鼠1-10 mg/kg, 狗0.3-3 mg/kg )的血浆药代动力学是线性的。血浆清除率比较低: 大鼠0.4 L/(kg•h) ，狗 0.3 L/(kg•h) ，分布体积(V(ss))稳定: 大鼠0.3 L/kg, 狗0.4 L/kg。在两种物种中口服之后消除半衰期都比较短 (0.9-2.3 hours)。

激酶实验

Factor Xa 活性分析:
在96孔板中利用发色的或荧光底物来测量Rivaroxaban对纯化的丝氨酸蛋白酶的活性。酶与Rivaroxaban或DMSO孵育10分钟。加入底物起始反应 ，利用Spectra Rainbow Thermo Reader 在405 nm或利用SPECTRAfluor 在630/465 nm连续监测荧光20分钟。酶活性实验在以下缓冲液中进行(终浓度): 人 FXa (0.5 nM), 兔 FXa (2 nM),大鼠 FXa (10 nM)或尿激酶 (4 nM)溶于50 mM Tris–HCl 缓冲液pH 8.3, 150 mM NaCl, 以及 0.1% BSA; Pefachrome FXa (50–800 μM) 或 chromozym U (250 μM) 带有凝血酶(0.69 nM), 胰酶 (2.2 nM), 或 血纤维蛋白溶酶(3.2 nM)溶于0.1 μM Tris–HCl, pH 8.0以及20 mM CaCl2; chromozym TH (200 μM), chromozym 胞浆素(500 μM)或 chromozym胰酶 (500 μM) 带有 FXIa (1 nM) 或 APC (10 nM) 溶于 50mM 磷酸盐缓冲液，pH 7.4, 150 mM NaCl;和 S 2366 (150 或 500 μM) 带有 FVIIa (1 nM) 以及组织因子(3 nM) 溶于50 mM Tris–HCl 缓冲液,pH 8.0, 100 mM NaCl, 5 mM CaCl2和 0.3% BSA, H-D-Phe-Pro-Arg-6-amino-1-naphthalene-benzylsulfonamide-H2O (100 μM)，测量 3小时。FIXaβ/FX 分析（包含FIXaβ (8.8 nM)和 FX (9.5 nM) 溶于50 mM Tris–HCl 缓冲液, pH 7.4, 100 mM NaCl, 5 mM CaCl2和0.1% BSA）从加入I-1100 (50 μM)开始测量60 分钟。 根据Cheng–Prusoff方程计算对FXa的抑制常数。IC50 是能使对照组反应初速度降低一半所需的抑制剂的量。

细胞实验

• Cell lines:Caco-2, 野生型和 P-gp过表达的 LLC-PK1
• Concentrations:0 到100 μM
• Incubation Time:2 小时
• Method:

  LLC-PK1和 L-MDR1细胞接种在96孔板中并插入微孔聚碳酸酯，在没有长春新碱的条件下培养4天。每隔两天换一次培养基。在分析开始前首先将培养基换成添加有10 mM HEPES 的HBSS缓冲液 。需要检测的不同化合物溶于DMSO并用转运缓冲液稀释相应的反应终浓度 (保持DMSO终浓度始终为1%)。加入适当浓度抑制剂， 37°C孵育2小时, 样品从每个孔中取出，加入乙酸铵缓冲液和乙腈然后利用液质联用质谱仪（LC-MS/MS）分析。

动物实验

• Animal Models:雄性禁食的Wistar 大鼠 (HsdCpb:WU) 以及雌性禁食的新西兰白兔 (Esd:NZW).
• Formulation:静脉注射用Rivaroxaban溶于聚乙二醇/ H2O /甘油 (996 g/100 g/60 g) 中;口服用Rivaroxaban溶于solutol/乙醇/H2O [40%/10%/50% (v/v/v)] 中
• Dosages:静脉注射≤0.3 mg/kg 口服 ≤3 mg/kg
• Administration:静脉注射或口服