福林酚

¥350.00

规格: 100mL

英文名字:Folin-Ciocalteu’s phenol reagent
质量标准:分子生物学级
SKU: MB2575-1 分类: ,

简介:福林酚也称福林酚蛋白检测试剂、福林酚蛋白测定试剂或福林酚蛋白定量试剂,常用于Lowry法测定蛋白浓度,也用于总酚类的定量。Lowry法,又名Folin-Phenol法,操作简单,为蛋白质测定最经典的高灵敏度方法之一。Lowry法检测原理与双缩脲法相同,但Lowry法在双缩脲法的基础上加入了福林酚试剂,极大地增加了显色量,从而显著提高了检测灵敏度。福林酚的检测原理为福林酚试剂不含苯酚,但可与酚类及非酚类还原物质发生反应,形成分光光度法可检测的显色物。

别名:Folin & Ciocalteu’s Phenol Reagent,Folin酚试剂

物理性状及指标:

外观:………………淡黄色至深黄色或淡黄绿色至深黄绿色澄清液体

浓度:………………1N

pH :………………<0.5 (20℃)

储存条件:2-8℃,避光防潮密闭干燥

运输条件:常温运输

产品用途:科研试剂,广泛应用于分子生物学、药理学等科研方面,严禁用于人体。福林酚常用于Lowry法测定蛋白浓度,也用于总酚类的定量。

使用方法:(仅供参考)

一、Lowry法测蛋白浓度

1.试剂准备:

A. Folin-酚试剂A:将1g Na2CO3溶于50mL 0.2moL/L NaOH中(溶液甲),再把5g(硫酸铜)CuSO4·5H2O溶于100mL 1%的酒石酸钾钠(或酒石酸钠)溶液(溶液乙),用时将溶液甲、溶液乙两种溶液按50:1混合,即得。(此试液临用前配置,一天内有效,过期失效)

B. Folin-酚试剂B:本试剂的浓度为1moL/L(即为1N),此为Folin-酚试剂B应用液。Folin-酚试剂平时应密封贮存于4℃冰箱中避光保存。

2.制备标准曲线:

取14支试管分成两组,分别加入0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1mL标准蛋白质溶液(250μg/mL),用水补足到1mL,加入5mL Folin-酚试剂A,混匀,于20~25℃放置10分钟,再加入0.5mLFolin-酚试剂B,立即摇匀,在20~25℃保温30分钟,然后于500nm处比色。

测定光密度值,取两组测定的平均值,以蛋白质浓度为横坐标,光密度值为纵坐标,绘制标准曲线值为定量的依据。

3.样本测定:

取1mL样品溶液(约合20~250μg多肽或蛋白质)加入5mL Folin-酚试剂A混匀,于20~25℃放置10分钟,再加0.5mL Folin-酚试剂B,立即摇匀,在20~25℃保温30分钟,然后于500nm处比色,以1mL水代替样品作空白对照。测定后,可以在标准曲线中查出未知样品的浓度。

若用0.5cm光程的比色杯进行比色,可按下面方法进行操作:取0.2mL样品溶液(约含5~100μg多肽或蛋白质)加入1mLFolin-酚试剂A(可选用0.3-0.5cm直径的小试管)混匀,10分钟以后,再加入0.1mLFolin-酚试剂B,立即混匀,30分钟后比色。一般来说,若多肽或蛋白质的浓度在2~25μg,测波长755nm,而25μg以上则采用500nm比色为宜。

注:

  1. 若福林酚试剂开封过久,由黄色变为绿色,可加入几滴液溴,稍加煮沸,试剂恢复至原色即可使用。
  2. FolIn试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸引起,若待测样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物,会对福林酚试剂的还原反应有干扰。
  3. 福林酚仅在酸性条件下稳定,但磷钼酸盐-磷钨酸盐还原反应条件为pH10。故加入福林酚试剂后请立即混匀,以防磷钼酸-磷钨酸盐被破坏,显色程度减弱。
  4. 用该方法测定蛋白浓度会受到蛋白质的特异性影响,即不同蛋白质因络氨酸、色氨酸含量的不同而使显色强度稍有不同,标准曲线也不是严格的直线形式。
  5. 本产品有腐蚀性,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其它物品。
规格

100mL

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