丹磺酰氯(DNSCl);丹酰氯

丹磺酰氯（DNSCl）；丹酰氯；Dansyl chloride
分子式：C12H12ClNO2S 分子量：269.75

简介：丹磺酰氯（丹酰氯；DNSCl；二甲氨基萘磺酰氯）是一种伯胺反应剂，一种强荧光剂，广泛用作荧光试剂。

别名：5-(Dimethylamino)naphthalene-1-sulfonyl chloride, DNSCl；二甲氨基萘磺酰氯
物理性状及指标：
外观：…………………黄色结晶粉末
MP：…………………72-74°C(lit.)
荧光性：………………λex337nm; λem492nm in chloroform (after derivatization with hexylamine)
溶解性：………………acetone: 0.2 g/10 mL；10 mM in DMSO； H2O: insoluble
敏感性：………………对湿度敏感
纯度：…………………>98%,for HPLC derivatization
储存条件：2-8℃，避光防潮密闭干燥
生物活性
丹磺酰氯是一种与脂肪胺和芳香胺中的伯氨基反应生成稳定的蓝色或蓝绿色荧光磺酰胺加合物的试剂。可用于测定肽链的氨基末端，它能专一地与链N-端α-氨基反应生成丹磺酰-肽，后者水解生成的丹磺酰-氨基酸具有很强的荧光，可直接用电泳法或层析法鉴定出N-端是何种氨基酸。用于氨基酸和肽的N末端衍生以及通过反相HPLC和其他分析方法检测多胺等。丹磺酰氯也广泛用于修饰氨基酸; 特别是蛋白质测序和氨基酸分析。 它也可以用来标记羟基和羧酸官能团。
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用途及描述：科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面，严禁用于人体。用于荧光N端衍生氨基酸和肽的荧光试剂，并通过反相HPLC检测。丹酰氯（DNSC）是一种伯胺反应剂，广泛用作荧光试剂，用于氨基酸和肽的N末端衍生以及通过反相HPLC和其他分析方法检测多胺等。
储液配置：

经典实验操作（仅供参考）
丹磺酰氯高效液相色谱仪测氨基酸实验
原理：蛋白质样品经酸或碱水解后再行用丹磺酰氯进行衍生蛋白质样品经酸或碱水解后再行用丹磺酰氯进行衍生化作用溶解于流动相溶液，用具有C8反相柱荧光检化作用溶解于流动相溶液，用具有C8反相柱荧光检测器的反相液相色谱进行测定，能很好地测定出各种测器的反相液相色谱进行测定，能很好地测定出各种氨基酸的含量。
实验步骤
1、样品处理与测定
（1）蛋白质的水解：称取1毫克的蛋白质样品或相当于1毫克蛋白质的样品于玻璃管中，加入1毫升 6mol/L盐酸后用磨口封口或烧结封口，移入110℃恒温箱中加热16小时，取出冷却。用微量注射器取20微升水解样液于小玻璃管中，加入10微升正亮氨酸作为内标溶液，并在水浴中蒸发干燥。
（2）衍生物制备及其测定：将上述干燥制备的样品加入40微升 pH=10.5 缓冲溶液，接着加入100 微升丹磺酰氯工作试剂，紧密封住管口，充分振摇15分钟，将样品管在100℃ 水浴中加热2分钟，取出冷却。吸取1毫升以1：1的比例相混合的甲、乙两种流动相的混合溶液于样品管中，充分振摇15秒，吸取10微升左右的此样品溶液注入液相色谱柱内，记录色谱图。
2、校正因子fi的确定用微量注射器吸取氨基酸标准混合溶液20微升于小玻璃管中，加入10微升正亮氨酸作为内标溶液，并在水浴中蒸发干燥，然后按样品处理中的方法制备标准氨基酸的衍生物，再加入1毫升流动相混合溶液，用微量注射器吸取5-10微升经衍生化的氨基酸溶液进入色谱仪，记录色谱图，并确定各氨基酸的出峰保留时间和峰面积，以及测量内标物和各氨基酸的峰面积，并求出各氨基酸校正因子fi。

丹磺酰化法分析蛋白质 N-末端氨基酸实验
原理：蛋白质的α-氨基与丹磺酰氯(DNS-Cl 是一种荧光物质) 反应, 生成DNS-蛋白质, 经水解可生成DNS-氨基酸。通过聚酰胺薄膜层析分析DNS-氨基酸, 可确定蛋白质的N-末端氨基酸。此法灵敏度高, 也可用于蛋白质的氨基酸组成的测定。聚酰胺对极性物质的吸附作用是: 它能和被吸附物质间形成氢键, 这种氢键的强弱决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。层析时展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离物在聚酰胺表面发生吸附、解吸附、再吸附和再解吸附的连续过程, 就能导致分离物达到分离的目的。
实验步骤
1. 标准氨基酸的丹磺酰化
分别称取2 . 3μmol 层析纯的氨基酸, 溶于0 . 5 ml 0 . 2 mol/ L碳酸氢钠溶液中。取0 . 1 ml 于有塞玻璃试管中, 加入0.1 mlDNS-Cl 丙酮溶液, 检查pH, 必要时用三乙胺调pH9 . 0～ 9 . 5 ,于室温(25 ℃ 左右) 下放置2～ 4 h。再用无离子水稀释10 倍,贮存于暗处。经层析, 得DNS-氨基酸的标准图谱。
2. 蛋白质N-末端氨基酸的DNS 化
取0 . 5 mg 蛋白质样品, 置于有塞玻璃管中。用少量水溶解后, 加入0 . 5 ml 0 . 2 mol/ L 碳酸氢钠溶液。再加入0 .5 mlDNS-Cl丙酮溶液, 用三乙胺调至pH9 . 0～9 . 5 , 塞好塞子, 于40 ℃ 烘箱中反应2 h , 或室温(25 ℃左右)放置2～4 h , 生成DNS-蛋白质。
3. DNS-蛋白质的水解
DNS 化反应结束后, 真空蒸去丙酮, 加入0 . 5 ml 6 mol/ L 盐酸溶解DNS-蛋白质。全部移入水解管, 抽真空封管, 于111 ℃烘箱中水解18～24 h。开管后蒸去盐酸, 加少量水, 再蒸干。重复2～3 次以除尽盐酸。
4. DNS-氨基酸的抽提
将上述水解产物, 加0 . 5 ml 水, 用1 mol/ L 盐酸调至pH2～3。加入0 . 5 ml 乙酸乙酯抽提, 分层可在细长滴管中进行。重复抽提2～3 次, 将上层抽提液合并于小试管中, 抽去乙酸乙酯,置于干燥器中备用。
5. DNS-氨基酸的层析与检测
生成的DNS-氨基酸和标准DNS-氨基酸分别进行聚酰胺薄膜层析。
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