ONPG；邻硝基苯-β-D-半乳糖苷

ONPG；邻硝基苯-β-D-半乳糖苷；2-Nitrophenyl β-D-galactopyranoside
分子式：C12H15NO8 分子量：301.25

简介： ONPG 是一种比色和分光光度计底物，用于检测 β-半乳糖苷酶活性。

别名：ONPG;邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷;o-Nitrophenyl β-D-galactopyranoside ONPG
物理性状及指标：
外观：……………………类白色结晶性粉末
熔点：……………………180-190℃(lit.)(dec.)
溶解性：…………………溶于水
密度：……………………1.60 g/cm3(预测)
含量：……………………>99%

储存条件：2-8 ℃，避光防潮密闭干燥

运输条件：常温运输

生物活性
β-galactosidase,将乳糖分解成半乳糖和葡萄糖。β-Galactosidase乳糖不具体,并将其作为一个简单的半乳糖苷。2-Nitrophenylβ-D-galactopyranoside水解导致半乳糖的释放和一个黄色的发色的化合物。试验底物不依赖诱导或本构渗透酶进入细胞，因此反应迅速，24小时内发生。
该酶对ONPG具有较高的水解能力（100%），对天然底物乳糖具有中等活性（25.7%）。然而，该酶对所有其它显色硝基苯基类似物的水解能力很弱，表明Gal308是具有窄底物特异性的β-半乳糖苷酶。为了研究重组酶的动力学参数，测定了Gal308对ONPG和乳糖的Michaelis-Menten常数(Km)、周转数(kcat)和催化效率(kcat/Km)。Kcat和Km值ONPG分别为464.7±7.8s-1和2.7±0.3mM,乳糖分别为264.2±2.1s-1和7.1±0.8mM。ONPG(172.1s-1mM-1)的kcat/Km值比乳糖(37.2s-1mM-1)高4.6倍，表明Gal308对ONPG的催化效率明显高于乳糖。

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用途及描述：科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面，严禁用于人体。 用于检测β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)活性，是β-半乳糖苷酶的显色底物。经β-半乳糖苷酶催化后可产生黄色产物，在410－420nm波长可以检测吸光度

经典实验操作（来源于公开文献，仅供参考）
激酶实验
本实验采用ONPG和乳糖两种底物测定β-半乳糖苷酶活性。通过跟踪ONPG释放出的邻硝基苯酚的量来测定ONPG的β-半乳糖苷酶活性。反应混合物由100μL的酶溶液和400μL的ONPG溶液(在pH 6.8的100mM Tris-HCl缓冲液中为2.5g/L)组成。在78℃孵育15分钟后，加入等体积的1M Na2CO3终止反应。通过测定A405，定量测定释放的邻硝基苯酚。一个活性单位是在测定条件下每分钟产生1μmol邻硝基苯酚所需的酶量。特异性活性以每毫克蛋白质单位表示。在含有100μL酶溶液和5%乳糖的同一缓冲液中测定对乳糖的活性，通过沸腾10分钟停止反应，并使用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶测定试剂盒测定葡萄糖的浓度。通过测定A492对释放的葡萄糖进行定量测定。一个酶活性单位被定义为每分钟释放1μmol葡萄糖所需的酶活性量。
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