PTC-209

PTC-209是一种有效的选择性BMI-1抑制剂，在HEK293T细胞系中IC50为0.5 μM，并导致癌症起始细胞(CICs)的不可逆减少。

特性

BMI-1选择性抑制剂，以BMI-1自我更新机制为靶点。

靶点

体外研究

在人类结肠直肠的HCT116 和人纤维肉瘤HT1080肿瘤细胞中， PTC-209 抑制UTR介导的报告基因和內源性BMI-1的表达。PTC-209 以BMI-1 依赖性减少直肠肿瘤细胞的生长。此外，PTC-209 通过对不可逆生长的抑制来损伤肿瘤起始细胞。

体内研究

在原代人类结肠癌异种移植、人类结肠癌细胞系LIM1215或HCT116异种移植的小鼠体内，PTC-209 (60 mg/kg/day, s.c.)能够有效抑制肿瘤组织中BMI-1的产生，并且使已经生成的肿瘤细胞停止生长。PTC-209也能降低体内功能性的结直肠癌CICs的频率.

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.0194 mL

10.0971 mL

20.1943 mL

5 mM

0.4039 mL

2.0194 mL

4.0389 mL

10 mM

0.2019 mL

1.0097 mL

2.0194 mL

50 mM

0.0404 mL

0.2019 mL

0.4039 mL

非编码区介导的荧光素酶报告基因的表达:
HEK293细胞用GEMS报告载体进行转染，GEMS报告载体转染包含侧翼荧光素酶开放阅读框和BMI-1 5′和3′ UTRs转录后调控。得到的稳定细胞（F8），用PTC-209或载体对照处理过夜，然后荧光素酶报告基因活性通过Bright-Glo测定法来确定。该测定以一式三份在各点运行，抑制百分比通过与载体对照组比较计算得出。

细胞实验：

• Cell lines:人类淋巴瘤U937和HT1080肿瘤细胞，原代人类外周血单核细胞和人类造血干细胞。
• Concentrations:~10 μM
• Incubation Time:4天
• Method:为确定用抑制剂预处理是否会影响肿瘤细胞的生长，细胞在抑制剂存在下被接种于体外培养4天，再以限制剂量接种于体外而不进一步添加抑制剂。使用台盼蓝排除法来计数活细胞。体外细胞群生成的速率在抑制剂处理后通过评估包含细胞群的孔数量来进行计算。对LDAs建立后PTC-209处理过的细胞的恢复实验，将其接种于6孔板，每孔1E6个细胞，并培养过夜。细胞随后以一式三份分别用DMSO载体或PTC-209 (0.01, 0.1, 1 以及10 μM)处理4天。洗掉用于处理的药物，所有孔中加入4毫升新鲜混悬介质。4天处理干扰后，进行细胞活性评估，细胞用胰蛋白酶处理，并且分别在移除药物0, 24, 72 以及120小时后计数细胞数。药物处理对细胞群形成能力的长期持久影响通过接种LDAs (50,000, 10,000, 1,000,100, 10 以及1 个细胞每孔)以药物处理4天，在120小时后得到的细胞进行评估。

动物实验：

• Animal Models:原代人类结肠癌异种移植、人类结肠癌细胞系LIM1215和HCT116异种移植的裸鼠。
• Formulation:14％的DMSO，36％聚乙二醇400和50％的聚丙二醇。
• Dosages:~60毫克/千克/天
• Administration:s.c.