PNU-120596

311.72

化学式

C13H14ClN3O4

CAS号

501925-31-1

稳定性

3 years -20°C powder

62 mg/mL (198.89 mM)

Ethanol

1 mg/mL (3.2 mM)

Water

Insoluble

PNU-120596是一种有效的α7 nAChR变构调节剂，EC50为216 nM。

靶点

体外研究

PNU-12059提高兴奋剂(Ach)诱发的人类α7 nAChR变体调节的钙离子流。PNU-120596作用于Xenopus oocytes，提高野生型受体调节的兴奋剂(胆碱和ACh)诱发的电流，在持续兴奋剂存在时，也引起激发反应延长。PNU-120596提高α7 nAChRs 通道的平均开放时间，但是对离子选择性没有作用效果，对单一传导也几乎没有效果。PNU-120596作用于急性海马区切片,提高Ach诱发的GABAergic突触后电流频率，这种作用可被TTX抑制,说明PNU-120596 调节位于海马神经元突触膜上的α7 nAChRs功能。除了阳性调节 α7 nAChR, PNU-120596显著抑制脱敏动力学，通过过度刺激α7 nAChR，而提高 Ca2+诱导毒性潜力。在内部β折叠处,过渡区，和兴奋剂结合处，与α7 nAChR结合，PNU-120596可改变对半胱氨酸的可到达率。PNU-120596的结合位点不在兴奋剂结合位点，PNU-120596通过引发构象效应，增强兴奋剂诱发的 烟碱受体门控，这与Ach促进的门控构象相似但不完全相同。

体内研究

30 mg/kg PNU-1230596给药处理，然后再使用carrageenan处理,现在减弱机械性痛觉过敏，长达 4小时。PNU-120596 治疗炎性水肿，降低carrageenan诱导的TNF-α和IL-6水平提高，而diclofenac只降低IL-6 水平。PNU-120596也可部分逆转carrageenan 或 CFA诱导形成的机械性痛觉过敏。

Ca2+荧光法:
表达α7 nAChR (α7*) 变种的SH-EP1 人类上皮细胞 生长在含非必需氨基酸且补充10%胎牛血清，L-谷氨酸，100 U/ml 青霉素/链霉素, 250 ng/mL fungizone, 400 μg/mL hygromycin B, 和 800 μg/mL geneticin的MEM培养基中。α7*是人α7 nAChR变种, 在第一个跨膜结构域 (T230P 和 C241S) 有两个点突变，可使在SH-EP1细胞中产生高功能性表达。细胞生长在含6% CO2的37oC孵育器中。细胞进行胰蛋白酶消化，然后按每孔2 × 104个细胞的密度置于96孔板中，板四周进行暗处理，底部清晰，2天后进行分析。细胞与Calcium reen-1AM混合物(分子探针) 在无水DMSO和20% pluronic F-127 (分子探针)中上样。此试剂直接加到每孔的生长培养基中，获得终浓度为 2 μM 的Calcium Green-1 AM. 细胞在染料中37oC下温育1小时，然后使用Mark’s改良的 Earle’s平衡盐溶液 (MMEBSS) 冲洗四次，MMEBSS 由以下组成 (inmM): 4 CaCl2, 0.8 MgSO4, 20 NaCl, 5.3 KCl, 5.6 D-葡萄糖,20 Tris-HEPES, 和120 N-甲基-D-葡糖胺, pH 7.4。循环四次后，细胞在37oC下至少温育10分钟。每孔中MMEBSS终体积为100 μL，所有孔中加入atropine，终浓度为1 μM。设计荧光成像酶标仪，使用500 mW 功率，在 488 nm 处激发Calcium Green，然后读取>525 nm处的荧光。曝光 0.5秒，照亮每孔。使用2.0或1.2 F-stop装置检测荧光。记录基准 30秒后，实验化合物加到96孔板的每孔中。每组实验中，有四个孔用于做空白对照 (0.2% DMSO)。

细胞实验：

• Cell lines:SH-SY5Y-α7 细胞
• Concentrations:3-10 μM
• Incubation Time:24 小时
• Method:SH-SY5Y-α7 细胞按每孔15,000个细胞(每mL含100 μL 1.5 × 105个细胞)的密度接种在96孔板中，孔中含完全生长培养基，置于37oC孵育器温育20到24小时。使用实验培养基 (不含PNU-120596)或含适当浓度 PNU-120596 的培养基更换完全生长培养基，然后再置于37oC孵育器中温育20到24小时。使用新鲜的实验培养基和每孔20 μL MTS 溶液(CellTiter96细胞活性试剂盒)更换培养基，然后再置于37oC孵育器中温育3小时，之后使用微孔板分光光度计在 490 nm读取吸光值。为了进行数据分析，数据归一化为未处理不含抑制剂的孔(100% 细胞活性) 和从含实验培养基和MTS溶液的孔中的吸光值。

动物实验：

• Animal Models:雄性Sprague Dawley 大鼠 (重 250–300 g)
• Formulation:PNU-120596 溶于5% DMSO 和 5% Solutol （溶于 PBS）
• Dosages:1 mg/kg
• Administration:静脉注射处理