GSK343

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CAS 号: 1346704-33-3
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GSK343是一种有效的,选择性EZH2抑制剂,无细胞试验中IC50为4 nM,比作用于EZH1选择性高60倍,比作用于其他组蛋白甲基转移酶选择性高1000倍以上。

理化数据

分子量

541.69

化学式

C31H39N7O2

CAS号

1346704-33-3

稳定性

3 years -20°C powder

溶解性

DMF

10 mg/mL warmed (18.46 mM)

Ethanol

4 mg/mL (7.38 mM)

DMSO

1 mg/mL warmed (1.84 mM)

生物活性

产品描述

GSK343是一种有效的,选择性EZH2抑制剂,无细胞试验中IC50为4 nM,比作用于EZH1选择性高60倍,比作用于其他组蛋白甲基转移酶选择性高1000倍以上。

特性

一种SGC表观遗传学整合的化学探针。在多种实体瘤中具有潜在用途。

靶点

EZH2 (Cell-free assay)

EZH1 (Cell-free assay)

4 nM

240 nM

体外研究

GSK343抑制H3K27 (H3K27me3)三甲基化,在HCC1806肺癌细胞中,IC50为174 nM。GSK343有效抑制乳腺癌细胞和前列腺癌细胞的细胞增殖,前列腺癌细胞系LNCaP对GSK343最敏感,IC50为 2.9 μM。GSK343显著抑制EOC细胞的生长,EOC细胞在模拟肿瘤体内微环境的3D人工基底膜细胞外基质(ECM)中进行培养。此外,GSK343也会诱导EOC细胞在3D中的凋亡,并显著抑制EOC细胞的侵染

实验操作(仅供参考)

激酶实验:

体外抗组蛋白甲基转移酶生物试验:
使用含5种成分的PRC2复合物(Flag-EZH2,EED,SUZ12,AEBP2,RbAp48)测定抗EZH2的活性。试验方案概括如下:10 mM储存的化合物在100%DMSO由固体制备。11点连续稀释的样板在384孔板(1:3 稀释,柱6和18是等体积的DMSO对照)中制备,使用声分配技术分装到测定备用板以制备一个100 nL的化合物样本和DMSO对照。实验条件由等体积的10 nM EZH2添加物和基底溶液(5 微克µg/毫升HeLa 核小体和0.25 µM [3H]-SAM)组成,使用多点结合分配到试验板中。反应板培育1小时,用包含0.1 mM未标记SAM的0.5毫克/毫升PS-PEI成像珠(RPNQ0098)等体积添加物淬灭。将平板密封,暗适应30分钟,5分钟端点发光图像通过Viewlux成像仪获得。板统计数据,如Z’和背景信号,以及剂量响应曲线通过活性BaseXE进行分析。EZH1的体外生物活性,以作为5个成员PRC2复合物的一部分通过384孔SPA试验进行评估,与EZH2相同。EZH1 和 EZH2的缓冲液成分,试剂配方,复板制备,淬灭条件和数据分析是相同的,终测试浓度为20 nM EZH1,5 μM/mL HeLa 核小体和0.25 μM [3H]-SAM。进一步的数据分析,pIC50的枢轴和可视化由TIBCO Spotfire激活。化合物分布在Reaction Biology Corp. (Malvern, PA)上,以评估他们在组蛋白甲基转移酶试验中的抑制作用。甲基转移酶的活性通过HotSpot技术,微型放射性同位素系滤膜结合测定法进行评估。将抑制剂溶解在二甲基亚砜(DMSO),测试浓度达到100 uM,最终DMSO浓度为2%。缓冲液包含所给浓度的甲基转移酶,和附表中的优选基底,在化合物存在下预培养10分钟。加入1 uM S-腺苷-L-[甲基-3H]甲硫氨酸(SAM)启动反应,在30℃下培育60分钟,随后转移到P81滤纸,并在检测前用PBS清洗。

细胞实验:

  • Cell lines:乳腺癌细胞系(HCC1806, Sk-Br-3, ZR-75-1),前列腺癌细胞系(DU145, PC3, LNCaP)
  • Concentrations:~50 μM
  • Incubation Time:6天
  • Method:为计算癌细胞系不同的倍增率,最佳的细胞接种通过检测所有细胞系在384孔板以一系列接种密度培养6天经验性确定。随后,细胞以最佳接种密度接种,并使其附着过夜。细胞以一式两份用20点2倍稀释系列的化合物或0.147% DMSO (载体对照)处理,并在37℃于5% CO2中培育6天。然后将细胞用每孔25微升CellTiter-Glo裂解细胞,化学发光用TECAN Safire2酶标仪测定。此外,未处理板中的细胞在加入化合物(T0)定量起始细胞数时采集。处理6天后的CTG值表示成T0值的百分数,标绘成化合物浓度的函数。数据用四参数方程拟合以产生浓度反应曲线,并获得抑制50%生长所需的化合物浓度(gIC50)。

储液配置

浓度溶剂体积(DMF)质量

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.8461 mL

9.2304 mL

18.4607 mL

5 mM

0.3692 mL

1.8461 mL

3.6921 mL

10 mM

0.1846 mL

0.9230 mL

1.8461 mL

运输条件:2~8℃运输

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规格

5mg, 25mg

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