Palomid 529 (P529)

Palomid 529抑制mTORC1和mTORC2复合体,降低pAktS473, pGSK3βS9,和pS6磷酸化，但是对pMAPK和pAktT308没有作用效果。

靶点

mTORC1

mTORC2

体外研究

Palomid 529抑制内皮细胞增殖并增加细胞凋亡。Palomid 529抑制VEGF-介导和bFGF介导的内皮细胞增殖，IC 50分别为20 nM和30 nM。Palomid 529可诱导内皮细胞凋亡，降低血管内皮生长因子VEGF-A驱动的pAktS473, pGSK3βS9和pS6磷酸化。然而，Palomid 529并不像有效降低pAktS473磷酸化一样抑制丝裂原活化蛋白激酶（pMAPK）磷酸化或pAktT308磷酸化。Palomid529不仅降低缺血性视网膜的增殖，也提高血管形成的组织和结构。[1]Palomid 529在肺癌NCI- 60细胞系中显示高效的抗增殖活性，GI50< 35μM。此外，Palomid 529在前列腺癌细胞PC-3显著加剧辐射引起的抗增殖作用。该生长抑制作用呈浓度依赖性。剂量为2和7μM可分别导致30和60%的生长抑制。Palomid 529在PC-3中抑制辐射诱导p-Akt激活和减少Bcl-2/Bax比例。Palomid 529不仅抑制辐射的Id-1和VEGF过表达也下调辐射诱导MMP – 2和MMP – 9

体内研究

Palomid 529剂量依赖性抑制Ad-VEGF-A驱动的血管生成，裸鼠灌胃后Palomid 529可抑制C6V10胶质瘤生长。Palomid 529作用于AktS473而非AktT308信号。Palomid 529抑制肿瘤生长，血管生成和血管通透性。与对照组相比，Palomid 529处理PC – 3肿瘤小鼠可减少57.1%的肿瘤的生长。Palomid 529可有效抑制Müller细胞增殖，神经胶质瘢痕形成，和在兔视网膜脱离（RD）模型中的感光细胞死亡。在小鼠Brca1缺失肿瘤生长模型中，Palomid 529显着抑制Akt和mTOR信号通路。

特征

Palomid 529是一种新颖的非类固醇类小分子抑制剂

GSK2126458 (GSK458)

MB3467

Torin 1

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.4604 mL

12.3022 mL

24.6045 mL

5 mM

0.4921 mL

2.4604 mL

4.9209 mL

10 mM

0.2460 mL

1.2302 mL

2.4604 mL

50 mM

0.0492 mL

0.2460 mL

0.4921 mL

雌激素受体结合实验:
利用TNT系统兔网织红细胞获得蛋白。根据经验确定每一个反应中模板用量和用 [35S]标记重组蛋白用凝胶电泳和显影检测蛋白表达。在100mL终体积TEG缓冲[ 10 mM Tris (pH 7.5), 1.5 mM EDTA, 10% 甘油]中进行雌激素受体（ER）和Palomid 529结合反应。每个结合反应中使用体外转录-翻译受体（5μL）和0.5 nM [3H]雌二醇(E2)。Palomid 529检测浓度一般10−11到10−6M 用乙醇稀释。4°C培养过夜，加入200mL葡聚糖包裹木炭检测E 2结合量。4°C摇床孵育15分钟，离心10分钟。150mL上清液加入到5mL闪烁混合物测定液中用于闪烁计数法。将只含乙醇E2的实验对照组读值设为最大结合值。背景组为5mL未表达E2的兔网织红细胞裂解液。背景值通常为最大结合值的10%到15%，将在所有测试值中扣除。利用检测值绘制曲线和测定Ki值。每个实验包含三次重复。

细胞实验：

• Cell lines:人脐静脉血管内皮细胞 (HUVEC)
• Concentrations:0 μM -20 μM
• Incubation Time:48小时
• Method:本增殖实验使用人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）。进行内皮细胞在96孔板中按1000个细胞每孔密度铺板，在完全培养基中培养。铺板后24小时，细胞用含0.5%血清饥饿培养24小时，后续将Palomid 529溶于含10 ng/mL bFGF或VEGF的完全培养基，继续培养细胞48小时。利用比色法计量细胞数量。结果显示Palomid 529未处理的细胞具有最大bFGF 或VEGF响应值。用Palomid 529处理 96孔板中内皮细胞48小时可抑制内皮细胞增殖。最初，每5000细胞铺板可在第二天达到细胞汇合。细胞板孵育又24个小时以保证细胞已生长阻滞后，再用Palomid 529处理。