NVP-BSK805 2HCl

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NVP-BSK8052HCl
分子式:C27H28F2N6O.2HCl分子量:563.47

简介:NVP-BSK805 2HCl是一种有效的,选择性的,ATP竞争性的JAK2抑制剂,比作用于JAK1, JAK3和TYK2选择性高20倍以上。
别名:BSK805 dihydrochloride; NVP-BSK 805 dihydrochloride;8-[3,5-Difluoro-4-(4-morpholinylmethyl)phenyl]-2-[1-(4-piperidinyl)-1H-pyrazol-4-yl]quinoxaline
物理性状及指标:
外观:………………白色至类白色固体
溶解性:……………DMSO:113 mg/mL (200.54 mM);Water:3 mg/mL (5.32 mM);Ethanol:15 mg/mL (26.62 mM)
含量:………………>98%

储存条件:-20℃,避光防潮密闭干燥
生物活性

产品描述

NVP-BSK805 2HCl是一种有效的,选择性的,ATP竞争性的JAK2抑制剂,IC50为0.5 nM,比作用于JAK1, JAK3和TYK2选择性高20倍以上。

靶点

JAK2
(Cell-free assay)

TYK2
(Cell-free assay)

JAK3
(Cell-free assay)

JAK1
(Cell-free assay)

~0.5 nM

10.76 nM

18.68 nM

31.63 nM

体外研究

NVP-BSK805是JAK2强有效的抑制剂,且对JAK2的特异性很好,其对JAK2的抑制效果比对JAK1, JAK3和TYK2要强20倍。0.5 nM 的NVP-BSK805对全长JAK2V617F和野生型JAK2酶产生一半的最大抑制效果。NVP-BSK805阻断JAK2V617F细胞(Ba/F3)的生长,且诱导细胞凋亡,其GI50在<100 nM的浓度。STAT5磷酸化作用是依赖JAK2的基本的磷酸化作用,在JAK2V617F突变的细胞中,大于等于100 nM的 NVP-BSK805像MB-02一样能显著抑制STAT5的磷酸化作用。分别用150 nM和1µM的NVP-BSK805孵育SET-2细胞,分别能抑制75%和95%的细胞生长,且在这两个浓度下培养24, 48和72小时,发现会引起浓度和时间依赖的细胞凋亡。可以检测裂开的PARP、Bcl-xL表达的减少和急剧增加的DNA含量少于2N的细胞数量,通过检测这些确定结果。NVP-BSK805引起的细胞凋亡是需要通过激活凋亡蛋白级联反应来实现的,而当在SET-2和MB-02细胞中抑制细胞凋亡蛋白酶caspase则可以抑制这种NVP-BSK805引起的细胞凋亡。在JAK2V617F细胞, SET-2和MB-02细胞中,NVP-BSK805能调节Bim的翻译后修饰和Mcl-1的水平。

体内研究

口服NVP-BSK805生物药的利用效率在小鼠体内的实验估计为45%,在大鼠实验中估计为50%。给携带Ba/F3 JAK2V617F细胞的小鼠模型口服150 mg/kg的NVP-BSK805能抑制STAT5的磷酸化,脾肿大及白血病细胞的扩散。给BALB/c小鼠口服25, 50和100 mg/kg剂量的NVP-BSK805,能抑制rhEpo诱导的STAT5磷酸化反应和rhEpo调节的红细胞增多和脾肿大。

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用途及描述:科研试剂,广泛应用于分子生物学,药理学等科研方面,严禁用于人体。NVP-BSK805 2HCl是一种有效的,选择性的,ATP竞争性的JAK2抑制剂,本品可用于相关领域的科研实验。
储液配置

浓度/体积/质量

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.7747 mL

8.8736 mL

17.7472 mL

5 mM

0.3549 mL

1.7747 mL

3.5494 mL

10 mM

0.1775 mL

0.8874 mL

1.7747 mL

50 mM

0.0355 mL

0.1775 mL

0.3549 mL

经典实验操作(仅供参考)

激酶实验:

酶活性分析:
构建含有人的JAK2激酶结构域(840-1132位氨基酸)的质粒pAcG2TtevJAK2。分别设计构建了JAK3 (813-1124), TYK2 (888-1187)和JAK1(866-1154)的质粒。通过产品手册(BD Biosciences Pharmingen)构建含有BD BaculoGoldTMBright线性DNA的融合杆状病毒,空斑实验以及单一斑块病毒扩增实验。用100 mL加了青霉素/链霉素(Sigma)的 ExCell420培养基(JRH Biosciences Ltd)在27 ℃培养Sf9细胞48小时,用于表达Janus激酶结构域。在悬浮培养的细胞浓度在1 × 106时进行感染,用感染病毒后可溶性蛋白的产量优化每个病毒的感染复数(MOI)。分别在MOI为1和0.5的时候表达人的JAK2的激酶结构域和JAK1, JAK3和TYK2的激酶结构域。27 ℃下培养48小时表达JAK2,而JAK1, JAK3和TYK2则需48或72小时表达。感染后48小时或72小时后,将100 mL表达培养基用3000 ×g离心5分钟收集细胞,用12 mL裂解缓冲液裂解细胞,缓冲液成分为50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 2 mM EDTA, 1 mM DTT, 1 mM原钒酸钠, 1 % Triton X-100, 10 % 甘油, 1× 不含EDTA的完全蛋白酶抑制剂混合物(Roche Diagnostics)和12.5 U/mL Benzonase。4℃孵育30分钟,14,000 × g离心45分钟分离颗粒性不可溶物质。然后在4 ℃下用GST标签亲和纯化蛋白激酶结构域。将之前离心所得的上清与0.2 mL含有50 %的谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B的悬浮液在4 ℃下孵育2小时,然后用1 mL含有50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.1 % Triton X-100, 1 mM DTT和10 %甘油的缓冲液洗5次。用0.25 mL的洗脱缓冲液(50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.1 % Triton X-100, 1mM DTT, 10 % 甘油, 10 mM还原性L-谷胱甘肽)洗脱结合到胶上的蛋白,分5次洗脱,每次孵育10分钟。用Amicon Ultra-4离心超滤管浓缩洗脱液到五分之一的体积。加入终浓度0.1 %的Brij35后,将蛋白分成小份,置于-80℃速冻保存,在这种储存条件下其激酶活性能保持至少6个月。在含有0.1 μM [γ33P]-ATP, 1 mM MnCl2, 5 mM MgCl2, 30 μM合成的多肽底物EQEDEPEGDYFEWLE, 1 mM DTT, 1 % DMSO, 50 μg/mL BSA, 0.01 % Brij35和50 mM Tris-HCl pH 7.5的缓冲体系中加入JAK激酶结构域作为酶,室温孵育30分钟。对于所有的蛋白ATP的浓度都低于其Km值。用XLfit® (型号205)的逻辑斯谛方程和全局拟合功能对曲线进行非线性回归拟合。像激酶实验的条件一样全长野生型JAK2及其突变体V617F的表达及鉴定,实验方法在其他地方已经介绍了。用内源激酶通路分析NVP-BSK805的激酶选择性实验,在Caliper实验中,在电场中当多肽底物被磷酸化后会有不同的迁移速度,以此来检测激酶实验。多肽带有荧光标签,可以在毛细管系统中用于检测、离子交换及定量。用LC3000仪器(Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA, USA)对多肽的荧光进行定量。激酶实验中激酶的活性可以通过检测剩余的ATP的数量来定量。LanthaScreenTMTR-FRET激酶实验中,铽元素当做镧系元素螯合物融合了抗磷酸化底物的抗体。

细胞实验:

  • Cell lines:Ba/F3细胞
  • Concentrations:100 nM
  • Incubation Time:72小时
  • Method:可以通过比色分析试剂盒WST-1 (Roche Diagnostics GmbH)来检测细胞存活率,用于分析对比用8点浓度范围的药物培养72小时后细胞的存活情况以及用DMSO处理细胞后产生相关的细胞增殖变化情况,这样可以检测JAK2抑制剂抑制细胞增殖的能力。重复三次后,计算平均值,XLfit 4 软件绘图,可以得到抑制最大生长一半(GI50)的数值。

动物实验:

  • Animal Models:RhEpo诱导的红血球增多症的雌性BALB/c小鼠
  • Formulation:NVP-BSK805要新鲜配制,配制在混合液MP/PEG300/Solutol HS15 (5/80/15%)中.
  • Dosages:50, 75和100 mg/kg
  • Administration:每天口服一次

【注意】
●我司产品为非无菌包装,若用于细胞培养,请提前做预处理,除去热原细菌,否则会导致染菌。
●部分产品我司仅能提供部分信息,我司不保证所提供信息的权威性,以上数据仅供参考交流研究之用。

备注:库存情况可能有所变动,请与我们销售人员确认为准,价格情况请直接联系我们销售人员。
我司所售出产品仅供于科研研究用途(非临床科研研究),每次销售产品行为都适用于我司网上所列明的通用销售条款

规格

10mg, 50mg, 5mg

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