Alisertib (MLN8237)

MLN8237 (Alisertib)是选择性的Aurora A抑制剂，IC50为1.2 nM，作用于Aurora A比作用于Aurora B选择性高200倍以上。

靶点

Aurora A

IC50

1.2 nM

体外研究

MLN8237作用于Aurora A选择性比作用于结构相关的Aurora B高200多倍，IC50为396.5 nM,而对205种其他激酶则没有显著活性。0.5 μM MLN8237处理MM1.S和OPM1细胞，抑制Aurora A磷酸化，而不影响Aurora B调节的组蛋白H3磷酸化。MLN8237作用于多发性骨髓瘤(MM)细胞系，显著抑制细胞增殖，IC50为0.003-1.71 μM。在BM基质细胞，IL-6和IGF-1存在时，MLN8237作用于原代MM细胞和MM细胞系，抗增殖活性比只有MLN8237单独作用时高很多。0.5 μM MLN8237作用于原代MM细胞和细胞系，使G2/M期细胞提高2到6倍，且显著诱导凋亡和衰老，涉及p53, p21和p27的上调,及PARP,caspase 3,和caspase 9的裂解。此外, MLN8237和Dexamethasone联用具有协同作用，具有强抗MM功效,而和Doxorubicin及Bortezomib联用则具有另外的功能。0.5 μM MLN8237处理FLO-1, OE19,和OE33食管腺癌细胞系，抑制集落形成，且显著提高多倍体细胞百分数,随后提高G1期细胞百分数,而与Cisplatin (2.5 μM)联用则效果进一步提高，与单独用药相比，诱导产生更多, TAp73β, PUMA, NOXA, cleaved caspase-3,和cleaved PARP。

体内研究

MLN8237口服处理，显著降低肿瘤负担，按15 mg/kg和30 mg/kg剂量处理肿瘤生长抑制率(TGI)分别为42%和80%,且与对照组相比，延迟小鼠寿命。MLN8237 (30 mg/kg)与Cisplatin (2 mg/kg)联用作用于FLO-1移植瘤，与单独用药相比，抗癌活性增强，伴随着Ki-67表达受抑制，细胞核p73蛋白和cleaved caspase 3表达增强。

特征

MLN8237是第一个口服有效的小分子Aurora A激酶选择性抑制剂。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9271 mL

9.6354 mL

19.2708 mL

5 mM

0.3854 mL

1.9271 mL

3.8542 mL

10 mM

0.1927 mL

0.9635 mL

1.9271 mL

50 mM

0.0385 mL

0.1927 mL

0.3854 mL

Aurora A放射性闪光板酶实验:
进行Aurora A放射性闪光板酶实验，测定体外MLN8237抑制程度。在Sf9细胞中表达重组Aurora A，然后使用GST亲和层析进行纯化。Aurora A 肽底物与生物素联合形成生物素-GLRRASLG。在50 mM Hepes (pH 7.5), 10 mM MgCl2, 5 mM DTT, 0.05% Tween-20, 2 μM 肽底物, 3.3 μCi/mL [γ-33P]ATP 2 μM, 和浓度不断增高的MLN8237 的混合物中进行Aurora A激酶 (5 nM)实验。

细胞实验

Cell lines:MM1.S, MM.1R, LR5, RPMI 8226, DOX40, OPM1, OPM2, INA6, 和U266

• Concentrations:溶于DMSO,终浓度为~10 μM
• Incubation Time:24, 48, 和72小时
• Method:使用不同浓度MLN8237处理细胞24, 48,和72小时。通过MTT实验测定细胞活力，通过测定 3[3H]-胸甘渗透而测定细胞增殖。为了分析细胞周期，使用70%乙醇在-20oC下使细胞通透，然后与50 μg/mL PI 和20 单位/mL RNase-A温育。 通过流式细胞仪使用 BDFACS-Canto II和FlowJo软件分析DNA含量。 为了测定凋亡和衰老，使用异硫氰酸荧光素-annexin V和PI对细胞进行染色。通过流式细胞仪使用 BDFACS-Canto II和FlowJo软件测定凋亡细胞。

动物实验

Animal Models:皮下接种 MM1.S 细胞的SCID鼠

• Formulation:在10% 2-羟丙基-β-环糊精/1％碳酸氢钠中配制
• Dosages:~30 mg/kg/day
• Administration:口服处理