Ispinesib (SB-715992)

Ispinesib (SB-715992, CK0238273)是有效的，特异性的，可逆kinesin spindle protein (KSP)（纺锤体驱动蛋白）抑制剂，Kiapp为1.7 nM,对CENP-E, RabK6, MCAK, MKLP1, KHC和Kif1A没有抑制作用。

靶点

KSP

IC50

1.7 nM (Ki app)

体外研究

Ispinesib是有效可逆的特定KSP变构抑制剂，KSP与微管的结合性能，通过抑制ADP释放而不改变微管中KSP-ADP复合体的释放，而扰乱KSP的运动。Ispinesib作用于一系列肿瘤细胞系,包括Colo205, Colo201, HT-29, M5076, Madison-109,和MX-1, IC50为1.2 nM到9.5 nM，具有很强细胞毒性。15 nM和30 nM Ispinesib作用于PC-3前列腺癌细胞,通过调节控制凋亡，细胞增殖，细胞周期，和信号的基因表达水平，如EGFR, p27, p15,和IL-11，而抑制细胞增殖和诱导凋亡。7.4 nM–600 nM Ispinesib作用于一组53种乳腺癌细胞系,具有广谱抑制活性。150 nM Ispinesib作用于BT-474和MDA-MB-468细胞,诱导凋亡,提高凋亡细胞比例，降低抗凋亡的Bcl-XL水平,和提高促凋亡的Bax和Bid水平。

体内研究

Ispinesib按4.5 mg/kg-15 mg/kg剂量作用于携带移植瘤的小鼠模型，有效抑制Colo205, Colo201, HT-29细胞，但是不抑制MX-1细胞。SB-715992按6 mg/kg-10 mg/kg剂量处理，也抑制小鼠实体瘤，包括Madison 109肺癌, M5076肉瘤,及L1210和P388白血病。Ispinesib按8 mg/kg-10 mg/kg剂量作用于携带乳腺癌细胞MCF-7, HCC1954, MDA-MB-468,和KPL4移植瘤的小鼠,抑制肿瘤生长。

Monastrol

MB4033

SB743921

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9340 mL

9.6701 mL

19.3401 mL

5 mM

0.3868 mL

1.9340 mL

3.8680 mL

10 mM

0.1934 mL

0.9670 mL

1.9340 mL

50 mM

0.0387 mL

0.1934 mL

0.3868 mL

人类KSP ATP酶活性和Ispinesib抑制的稳定动力学分析:
使用丙酮酸激酶-乳酸脱氢酶检测体系进行驱动蛋白的特异性分析，伴随着NADH氧化产生ADP。在340 nm处检测吸光度的变化。使用纳摩尔浓度KSP进行稳态研究， 使用一个敏感的荧光为基础的检测系统，利用丙酮酸激酶，丙酮酸氧化酶，辣根过氧化物酶（HRP）耦合的检测体系， 伴随着Amplex红色荧光试剂氧化为试卤灵而生成ADP。通过荧光检测产生的试卤灵。在含10 µM paclitaxel紫杉醇的PEM25 buffer [25 mM Pipes-K+(pH 6.8), 2 mM MgCl2, 1 mM EGTA]中进行稳态生化试验。在含500 µM ATP, 5 µM 微管,和1 nM KSP的PEM25 buffer中测定抑制稳定的IC50值。通过剂量-反应曲线获得Ispinesib的Ki app(明显的抑制剂解离常数)值, 通过使用Morrison方程明确纠正酶浓度。在稳态情况下测定抑制剂形态（竞争性，非竞争性，无竞争力的，或者混合生物）。

细胞实验

• Cell lines:Breast 乳腺癌细胞，包括MCF-7, HCC1954, MDA-MB-468,和KPL4
• Concentrations:0.085 nM-33 μM
• Incubation Time:72小时
• Method:指数生长期细胞接种在96孔板上，用Ispinesib处理72小时。然后使用CellTiter-Glo测量细胞生长, 并使用BioTek FLx800测定荧光值。分析数据，计算IC50值。

动物实验

• Animal Models:携带MCF7, KPL4,和HCC1954细胞的(nu/nu)裸鼠模型，携带MDA-MB-468 细胞的SCID小鼠模型
• Formulation:溶于10% 乙醇, 10% cremophor, 和 80% D5W (葡萄糖5%)
• Dosages:10 mg/kg作用于裸鼠，8 mg/kg作用于SCID 鼠
• Administration:3倍剂量腹腔注射，每隔四天进行一次