TH-302

TH-302是选择性低氧激活的前体药物，靶向作用于实体瘤的hypoxic区域，IC50为19 nM,在缺氧条件下比在有氧条件下细胞毒性增强270倍，细胞色素P450代谢稳定。

体外研究

TH-302是低氧激活的前体药物，目前处于临床评测阶段。在含氧情况下，TH-302作用于椭圆形细胞比作用于单分子层细胞效果强很多。在有氧情况下，TH-302是非常有效的，且在肝脏微粒体中很稳定。在N2环境下，TH-302作用于人类肺癌H460细胞和人类结肠癌HT29细胞，具有高毒性。TH-302抑制H460细胞和HT29细胞，IC90分别为0.1和0.2 μM。TH-302作用于多发性骨髓瘤具有低氧选择性和剂量依赖性。在低氧条件下，TH-302诱导细胞周期停在G0/G1期。通过下调cyclin D1/2/3, CDK4/6, p21cip-1, p27kip-1,和pRb表达来调节TH-302作用于细胞周期的影响,而CDK2表达对此没有作用效果。在低氧条件下，TH-302作用于人类和鼠多发性骨髓瘤细胞，诱导细胞凋亡，这种作用存在剂量依赖性。通过下调抗凋亡蛋白BCL-2和BCL-xL,还有上调裂开的凋亡前体蛋白caspase-3,-8,和-9，及ＰＡＲＰ的表达来调节TH-302激活的凋亡。与低氧环境下特殊的毒性相比，在含氧正常的环境下或者高氧环境下，TH-302显示低毒性。

体内研究

实验移植第25天，TH302抑制肿瘤生长，抑制率达41%，但是TH302和gemcitabine联用抑制肿瘤生长，抑制率达96%。TH-302按6.25, 12.5, 25,或50 mg/kg剂量腹腔注射到H460 NSCLC移植模型，每天处理一次，每周处理5次，持续2周，在第22天，肿瘤生长抑制率分别为43%, 51%, 75%,和89%。TH-302按100 mg/kg剂量作用于血细胞，处理后3天，血细胞下降，但是在处理后7天完全恢复。TH-302诱导细胞死亡，依赖于氧浓度，当作用于携带肿瘤的鼠在低氧浓度环境下，则毒性最高。TH-302作用于呼吸氧气需10% O2的动物，抑制肿瘤生长明显低于呼吸需95% O2的动物。TH-302处理后48小时, pimonidazole阳性区明显降低(对照组为6.3±1.2%，TH-302实验组为1.8±1.1%)。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.2270 mL

11.1349 mL

22.2697 mL

5 mM

0.4454 mL

2.2270 mL

4.4539 mL

10 mM

0.2227 mL

1.1135 mL

2.2270 mL

50 mM

0.0445 mL

0.2227 mL

0.4454 mL

• Cell lines:人类H460或HT29细胞
• Concentrations:0.01 -1 μM
• Incubation Time:2小时
• Method:指数生长的人类H460或HT29细胞按每孔3×105个细胞接种在60 mm有缺口的玻璃板上，在含10%FBS的RPMI培养基上生长2天。实验开始第一天,已知浓度TH-302溶液准备在完全培养基中，玻璃板上每孔加入2 mL溶液。玻璃板置于厌氧培养室或标准组织培养孵育器。在厌氧培养室中充满厌氧气体混合物(90% N2/5% CO2/5% H2)，形成低氧环境。细胞和TH-302在37oC下温育2小时。处理到最后，移除板，用PBS冲洗，然后用胰蛋白酶-EDTA使胰蛋白酶化，在37oC下进行5分钟。分离的细胞用培养基和血清中和，然后在100g转速下旋转5分钟。细胞按1×106个细胞/mL再悬浮，然后稀释10倍。测定每组溶液的确切浓度。已知数目的细胞在第9天和第13天接种和置于孵育器中。菌落混合，用95%乙醇和0.25%结晶紫染色。计数超过50个细胞的菌落，测定存活率。

动物实验

• Animal Models:雌性NCI SCID鼠
• Formulation:溶于盐溶液
• Dosages:50 mg/kg
• Administration:腹腔注射