THZ1

THZ1 是有效，选择性的共价CDK7抑制剂，IC50为 3.2 nM。

靶点

IC50: 3.2 nM (CDK7)

体外研究

THZ1抑制Jurkat细胞和Loucy细胞，IC50分别为50 nM和0.55 nM。 THZ1显示体外CDK7的时间依赖性抑制和细胞内CDK7的共价结合。 THZ1（9,27,83,250,750和2500nM）抑制CDK12，但与CDK7相比浓度更高。 THZ1（1μM）不可逆地抑制RNAPII CTD和CAK磷酸化。 THZ1（2.5μM）通过共价靶向位于Hela S3细胞中CDK7激酶结构域外的独特半胱氨酸，不可逆地抑制RNAPII CTD磷酸化。 THZ1（250nM）导致细胞增殖减少和细胞凋亡指数增加，同时抗凋亡蛋白减少，最显着的是T-ALL细胞系中的MCL-1和XIAP。 低剂量THZ1（50nM）治疗引起食管鳞状细胞癌（OSCC）中许多致癌转录物的选择性抑制。 所有基因型不同的人（hSCLC）细胞系对THZ1表现出高度敏感性，IC50在5-20nM范围内。

体内研究

THZ1（10 mg / kg）显示有效杀死原发性慢性淋巴细胞白血病（CLL）细胞和抗原发性TALL细胞的抗增殖活性，并在体内对抗人T-ALL异种移植物.THZ1（10 mg / kg，ip）完全抑制 食管鳞状细胞癌肿瘤在体内生长而不丧失体重或其他常见的毒性作用。 THZ1（10mg / kg，i.v。）抑制人MYCN-扩增的NB小鼠模型中的肿瘤生长，并且没有毒性。

BS-181 HCl

MB4025

PHA-793887

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.7666 mL

8.8331 mL

17.6663 mL

5 mM

0.3533 mL

1.7666 mL

3.5333 mL

10 mM

0.1767 mL

0.8833 mL

1.7666 mL

对于免疫沉淀来自HCT116的flag-cdk7蛋白或来自293a细胞溶解物的flag-cdk12后的激酶分析，细胞首先在37°C下用thz1、thz1-r或dmso处理4小时。然后在50 mM Tris-HCl ph 8.0、150 mM NaCl、1%NP-40、5 mM EDTA和蛋白酶/磷酸酶混合液中通过溶解获得细胞。外源性CDK7或CDK12蛋白通过标记抗体结合琼脂糖珠从细胞溶解液中免疫沉淀。沉淀蛋白用溶解缓冲液洗涤6次，然后用激酶缓冲液（40 mM hepes pH7.5，150 mM nacl，10 mM mgCl2，5%甘油）洗涤2次，并在30℃下以1μg RNAPII（RPB1）大亚单位为底物，25μm atp和10μci 32p atp进行体外激酶测定45分钟。用重组cdk7/tfiiih/mat1进行激酶测定，方法如上所述，每次反应使用25 ng的cak复合物。对于设计用于测试CDK7激酶活性的时间依赖性失活的激酶分析，在接受激酶分析条件前，在30°C的无ATP的激酶缓冲液中，用指定浓度的THZ1、THZ1-R或DMSO预培养4小时。

细胞实验

Jurkat、Loucy、KOPTK1和DND-41细胞系在384孔板中以15%的浓度与5%胎牛血清和青霉素/链霉素共混培养。细胞经THZ1(2、10、50、250、1250和6250 nM)或DMSO处理72小时后，用resazurin测定细胞活力。

动物实验

THZ1在10%二甲基亚砜和5%葡萄糖水中制备。
小鼠
将32只NOD-SCIDIL2Rcγnull（NSG）9周龄雌性小鼠分成基于平均BLI的治疗组，如下：THZ1 10mg / kg qD，THZ1 10mg / kg BID和载体（D5W中10％DMSO） BID（所有组n = 10）。排除两只小鼠，一只具有最高，一只具有最低的BLI。所有治疗均通过侧尾静脉中的IV注射以3.3μL/ g（非盲）的体积施用。每3-5天对小鼠进行成像和称重。将小鼠治疗四周，并在最后一天对小鼠进行成像，给药并在给药后约5-6小时处死。处死后，在EDTA管中通过心脏穿刺收集血液;处理一部分（300μL）用于等离子体。从每只小鼠收集肝脏和脾脏组织，每个样品的一半快速冷冻，每个样品的一半固定。处理血浆和肝脏样品用于THZ1的药代动力学分析。将脾组织匀浆并裂解并处理以用于THZ1靶接合的药效学分析。