Apremilast (CC-10004)

Apremilast (CC-10004)是一种口服生物有效的PDE4和TNF-α抑制剂，IC50分别为74 nM和77 nM。

靶点

体外研究

Apremilast抑制PDE4比其他PDE家族的cAMP 或cGMP水解酶更有效。Apremilast作用于多种类型的细胞，具有广泛的抗炎活性，抑制TNF-α,IL-12和IL-23的产量，及NK和角质形成细胞的反应。Apremilast抑制IL-8中酵母多糖诱导的PMN产生，IC50为94 nM。Apremilast 抑制fMLF诱导的PMN CD18 和CD11b表达，IC50分别为390 nM 和 74 nM, 且抑制fMLF诱导的PMN与HUVECs 粘连，IC50 为150 nM。Apremilast 抑制角质形成细胞TNF-α的产生, 通过测量细胞内ATP水平发现Apremilast对角质形成细胞存活力没有影响。

体内研究

在有人类微粒体(t1/2>60 min)存在时，Apremilast是稳定的。90%蛋白在人体血浆中结合。口服和静脉给药雌性大鼠，显示Apremilast具有良好的药代动力学，低清除力，适中的容积分布，口服生物利用度为64%。Apremilast在体内处理LPS诱导的TNF-α抑制大鼠模型，检测Apremilast抑制TNF-α的能力，测定ED50为0.03 mg/kg。Apremilast处理另一个LPS诱导的中性粒细胞大鼠模型，ED50为0.3 mg/kg 到 0.9 mg/kg

92 mg/mL (199.78 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

PDE4 抑制活性:
细胞(1×109)在PBS中洗涤，在冷的匀浆缓冲液(20 mM Tris-HCl, pH 7.1, 3 mM 2-巯基乙醇, 1 mM MgCl2, 0.1 mM EGTA, 1 μM PMSF, 1 μg/mL Leupeptin)中裂解。在Dounce匀浆器中进行匀浆，离心收集上清液，上样到Sephacryl S-200柱，在匀浆缓冲液中平衡。在匀浆缓冲液中洗脱PDE，收集Rolipram敏感组分，并等分存储。在 50 mM Tris- HCl, pH 7.5, 5 mM MgCl2 和 1 μM cAMP (含1% 3H cAMP)中，在有各种浓度抑制剂存在时，检测酶活性。预先测定使用的提取物的量，确保反应在线性范围内及消耗的总底物低于15%。反应在30°C下进行30分钟，沸腾2分钟终止反应。然后将样品冷冻，使用蛇的毒液 (1mg/mL)在30°C下处理15分钟。移除未使用的底物，使用200 μL AG1-X8树脂温育15分钟。样品在3000rpm转速下离心5分钟，采取50μL 水相进行计数。进行三次独立实验，通过剂量反应曲线测定IC50值。

细胞实验：

• Cell lines: HEK细胞
• Concentrations: ~10 μM
• Incubation Time: 18 小时
• Method: 人类新生儿包皮 表皮的角质形成细胞（HEKn细胞）按每孔3000个细胞接种于96孔平底组织培养板中，培养2天。使用 Apremilast 或 0.1% DMSO（空白对照）处理HEKn 细胞1小时，使用UV Stratalinker 2400在50 mJ/cm2 时进行紫外线B（UVB）照射，使用312 nm UVB 灯泡校准。更换培养基和化合物，细胞温育18小时。 裂解液转移到实验板上，震荡2分钟，使用TopCount NXT发光计数器读取化学发光值。

动物实验：

• Animal Models: 银屑病小鼠模型
• Formulation: 0.5% CMC 和 0.25% Tween-80
• Dosages: 5 mg/kg/day,分成每天两次的剂量
• Administration: 口服处理

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1716 mL

10.8578 mL

21.7155 mL

5 mM

0.4343 mL

2.1716 mL

4.3431 mL

10 mM

0.2172 mL

1.0858 mL

2.1716 mL

50 mM

0.0434 mL

0.2172 mL

0.4343 mL