瑞沙托维

Resatorvid (TAK-242) 是一种有效的TLR4信号传导抑制剂，可选择性地抑制TLR-介导的细胞因子和一氧化氮的产生。

靶点

TLR4

体外研究

在RAW264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞中，TAK-242抑制脂多糖（LPS）诱导的NO，肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素（IL）-6的产生，IC50为1.1至11 nM。 TAK-242还抑制来自LPS刺激的人外周血单核细胞（PBMC）的这些细胞因子的产生，IC50值为11至33nM。

体内研究

TAK-242明显降低了两种基因型小鼠的血清抗dsDNA水平。另外，tak-242也明显抑制了IFN-γ、TNF-α和IL-1β的产生，但其浓度仍远远高于NS处理的对照组。TAK-242应激前给药可防止潜在有害炎症和氧化/硝化介质在大鼠大脑额叶皮层的积聚。TAK-242静脉注射在应激期开始时完全阻断了应激暴露后TLR-4的mRNA和蛋白的上调。

Resiquimod(R848)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.7638 mL

13.8190 mL

27.6381 mL

5 mM

0.5528 mL

2.7638 mL

5.5276 mL

10 mM

0.2764 mL

1.3819 mL

2.7638 mL

TAK-242溶于N，N-二甲基甲酰胺中，然后用适当的介质稀释后使用。
RAW264.7细胞以3×106细胞/孔的密度接种在6孔培养板中，培养过夜。用添加有1%胎牛血清和10μg/ml卡那霉素的RPMI 1640培养基洗涤后，在有或无TAK-242（1-100 nM）的情况下，用5 ng/ml LPS和1 U/ml IFN-γ刺激细胞，持续时间为指示时间。去除培养上清液，使用总RNA分离试剂等原分离总RNA。总RNA用taqman反转录试剂逆转录成cDNA。利用预先开发的Taqman分析试剂和通用PCR主混合物，在ABI Prism 7700上对TNF-α和IL-6进行定量实时PCR分析。用比较阈值循环法定量mRNA。刺激达到的最高控制水平（无TAK-242）被视为100%，其他时间点的控制组和TAK-242添加组的水平被表示为最高控制水平的百分比。

动物实验

将TAK-242溶解在载体（盐水）（小鼠）中。
将TAK-242溶于载体（0.9％DMSO）（大鼠）中。
小鼠
C57BL / 6背景（雌性，10周龄）的30只ApoE – / – 和30只野生型小鼠在标准光照条件下（12小时光暗）喂食含有0.25％胆固醇和15％可可脂的高脂饮食循环）和温度（21±1℃）。矿泉水随意饮用。将两种基因型的小鼠随机分配至LPS或LPS + TAK-242或盐水给药。分别通过腹膜内注射给予LPS（2.5mg / kg），LPS（2.5mg / kg）加TAK-242（0.3mg / kg）和盐水，每周两次，持续4周。在实验结束时，所有小鼠都接受了安乐死，注射过量戊巴比妥（50mg / kg）。
大鼠
使用最初重200至225g的雄性远交Wistar Hannover大鼠。 TAK-242是i.v.在将动物引入塑料限制器后立即（约10秒）以0.5mg / kg的剂量注入尾静脉。该剂量是基于之前的体内研究选择的，该研究报告了其在暴露于缺氧的小胶质细胞中的抗炎/抗氧化和神经保护特性。浓度为0.9％的二甲基亚砜用作载体。