TubastatinAHCL

Tubastatin A是有效的，选择性HDAC6抑制剂，IC50为15 nM，选择性作用于所有其他同工酶（1000倍以上），除了HDAC8(57倍以上)。

靶点

HDAC6

HDAC8

IC50

15 nM

854 nM

体外研究

Tubastatin A对所有11种HDAC亚型都有选择性,对HDAC6的IC50为15 nM，是除HDAC8以外其它所有亚型的1000多倍，是对HDAC8选择性的57倍左右。Tubastatin A对HDAC8 IC50为854 nM。Tubastatin A对同型半胱氨酸(HCA)诱导的神经细胞死亡具有保护作用，从5 μM开始这种保护作用具有剂量依赖特性，到10 μM时基本可以完全保护细胞不受损伤。在体外100 ng/mL Tubastatin A增强Foxp3+ T-regulatory细胞(Tregs)对T细胞增殖的抑制。Tubastatin A处理C2C12细胞会导致在成肌过程早期α-微管蛋白高乙酰化时肌管形成不正常;但是肌管延长正是发生在α-微管蛋白高乙酰化时。近期研究发现在小鼠卵巢癌细胞系MOSE-E和MOSE-L中，Tubastatin A处理会增加细胞弹性，这是在不剧烈改变肌动蛋白微丝和微管网络的情况下用原子力显微镜检测的结果

体内研究

在多种实验性结肠炎，主要组织相容性复合体-心脏同种移植排斥等炎症与自身免疫病小鼠模型中，每天用0.5mg/kg Tubastatin A处理会抑制HDAC6促进T-regulatory细胞(Tregs)的抑制活性

Rocilinostat (ACY-1215)

MB3745

Tubastatin A

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.6892 mL

13.4459 mL

26.8918 mL

5 mM

0.5378 mL

2.6892 mL

5.3784 mL

10 mM

0.2689 mL

1.3446 mL

2.6892 mL

50 mM

0.0538 mL

0.2689 mL

0.5378 mL

酶抑制作用分析:
该实验由 Reaction Biology 公司的Malvern, PA利用 Reaction Biology HDAC 光谱平台完成(www.reactionbiology.com). HDAC1, 2,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10和11 的分析使用人源重组的相应蛋白; HDAC3的分析使用HDAC3/NcoR2 复合物。HDAC1, 2, 3, 6, 10和 11的底物选用荧光标记的 p53肽段379-382 (RHKKAc); HDAC8 的底物荧光标记的二酰基 p53肽段379-382 (RHKAcKAc). HDAC4, 5, 7和 9的底物选用乙酰基 –赖氨酸 (trifluoroacetyl)-AMC。Tubastatin A 溶于 DMSO并从30 μM浓度开始连续三倍稀释用于10-dose IC50模型检测 。Trichostatin A的对照化合物(TSA) 从5 μM开始连续三倍稀释用于10-dose IC50 模型检测。 IC50值从曲线拟合中剂量与响应的斜率中获得。

细胞实验

• Cell lines:Sprague-Dawley 大鼠胎鼠的原代皮质神经元 (胚胎期第 17天)
• Concentrations:0, 1.0, 2.5, 5.0, 7.5 和10 μM
• Incubation Time:24 小时
• Method:从Sprague-Dawley 大鼠胎鼠(胚胎期第 17天)的大脑皮层中获得原代皮质神经元。细胞接种后24小时开始实验。在这一条件下细胞对谷氨酸介导的兴奋毒性不敏感。为了进行毒性实验, 细胞经PBS洗过之后 接种到极限必须培养基(Invitrogen)中，成分包含 5.5 g/L 葡萄糖, 10%胎牛血清, 2 mM L-谷氨酰胺和100 μM 胱氨酸。 在培养基中加入谷氨酸类似物homocysteate (HCA; 5 mM) 来诱导氧化应激。 HCA从 pH 7.5的母液稀释100倍获得。 加入 HCA后, 再加入一定浓度Tubastatin A 处理神经元。24小时后通过MTT法分析细胞存活情况 。

动物实验

• Animal Models:用野生型或HDAC6-/-小鼠上取出的Naïve CD45RBhi CD4+ CD25- 细胞 (1 × 106) 腹腔注射B6/Rag1-/-小鼠
• Formulation:溶于DMSO
• Dosages:0.5 mg/kg
• Administration:每天腹腔注射