Rofecoxib

Rofecoxib 是一种COX-2抑制剂，IC50为18 nM。

靶点

体外研究

Rofecoxib抑制人骨肉瘤细胞中COX-2依赖性PGE2的产生，IC50为26 nM。Rofecoxib是一种纯化的人重组COX-2的时间依赖性抑制剂，IC50为0.34 μM。Rofecoxib引起纯化的人COX-1非时间依赖性抑制。在人全血试验中，Rofecoxib选择性抑制脂多糖诱导的，COX衍生的PGE2合成，IC50值为0.53 μM，相比而言，抑制血凝固后COX-1衍生的血栓素B2的合成，IC50值为18.8 μM。Rofecoxib适度抑制phenacetin O-脱乙基作用，IC50为23 μM。与微粒体和NADPH预培养30分钟，显著增加Rofecoxib的抑制作用，IC50为4.2 μM。CYP1A2通过Rofecoxib的失活需要NADPH，并且以4.8 μM 的Ki为特点。

体内研究

Rofecoxib有效抑制角叉菜胶诱导的足肿胀，角叉菜胶诱导的足痛觉过敏，以及脂多糖诱导的热症，IC50分别为1.5 mg/kg，1.0 mg/kg 和0.24 mg/kg。Rofecoxib也会阻断佐剂诱导的关节炎，IC50 为0.74 mg/kg/day。在大鼠体内，Rofecoxib也对佐剂诱导的软骨和骨结构损伤具有保护作用。Rofecoxib口服给药降低用CCl4处理8周的大鼠门静脉压。此外，在CCl4处理的大鼠中，rofecoxib给药减少活化HSCs的数量，并下调三个检测型胶原蛋白，层粘连蛋白，VEGF 和CTGF的肝脏蛋白质水平。

MB3613

NS398

MB4600

地拉考昔

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.1811 mL

15.9053 mL

31.8107 mL

5 mM

0.6362 mL

3.1811 mL

6.3621 mL

10 mM

0.3181 mL

1.5905 mL

3.1811 mL

50 mM

0.0636 mL

0.3181 mL

0.6362 mL

体外重组人COX-1 和 COX-2生物化学和药理学抑制研究试验:
重组人COX-1和COX-2的微粒体制剂从牛痘病毒-COS-7细胞表达系统制备。重组人COX-1和COX-2在杆状病毒-Sf9细胞中表达，并将酶纯化。酶活性通过荧光检测测量还原剂共底物高香草酸氧化型的表型或氧消耗监测。HPLC试验，用于评估0.1 μM花生四烯酸底物浓度下Rofecoxib对纯化COX-1的抑制，COX-2 和Rofecoxib复合物化学计量的测定，酶抑制剂复合物在酶活性恢复后的解离速率常数，完整Rofecoxib从复合物中的恢复均如上进行。Rofecoxib HPLC分析的溶剂体系为15:85 MeOH/磷酸钾水溶液(1 g/L)，以15%-75% MeOH线性梯度洗脱25分钟，在Novapak C18柱上以275 nm检测。

细胞实验

• Cell lines:人骨肉瘤细胞系和人淋巴瘤 U937 细胞
• Concentrations:0.5 μM, 8 μM
• Incubation Time:15分钟
• Method:通过反转录-聚合酶链反应和免疫印迹，人骨肉瘤细胞系能够选择性表达COX-2，而未分化的人淋巴瘤U937细胞选择性表达COX-1。花生四烯酸刺激后，这些细胞的PGE2产物分别用作COX-2和COX-1活性的指标。Rofecoxib与细胞在无血清条件下[Hanks平衡盐溶液(HBSS)]预培养5带15分钟，然后用10 μM花生四烯酸刺激10分钟，再测量PGE2的产生。每个细胞系中的COX活性根据花生四烯酸存在或不存在下样品中PGE2浓度的差别定义。

动物实验

• Animal Models:大鼠佐剂性关节炎(AIA)模型
• Formulation:80% PEG 200 在蒸馏水中
• Dosages:0.1 mg/kg/day，0.3 mg/kg/day，1.0 mg/kg/day，以及 3.0 mg/kg/day
• Administration:口服