PHA-665752

PHA-665752是一种有效的，选择性的，ATP竞争性c-Met抑制剂，在无细胞试验中IC50为9 nM，对c-Met的选择性比对 RTKs和 STKs高50倍以上。

靶点

体外研究

PHA-665752 显著抑制c-Met激酶活性，Ki为4 nM，IC50为 9 nM, 且与多种酪氨酸和丝-苏氨酸激酶相比，作用于c-Met选择性高50多倍。PHA-665752 有效抑制HGF 刺激的c-Met自磷酸化，IC50为25-50 nM。PHA-665752也显著抑制HGF-和c-Met-依赖的功能，如细胞运动和细胞增殖，IC50分别为40-50 nM和 18-42 nM。此外, PHA-665752 作用于多种肿瘤细胞系，有效抑制HGF-刺激的或组成型的c-Met下游调节器如 Gab-1, ERK, Akt, STAT3, PLC-γ,和FAK的磷酸化。PHA-665752作用于TPR-MET-转化的BaF3细胞，抑制细胞生长，这种作用存在剂量依赖性，0.2 μM PHA-665752也抑制组成型细胞活力和迁移，抑制率达92.5%。0.2 μM PHA665752抑制c-Met，也诱导33.1%细胞凋亡，且使G1期细胞从42.4% 提高到77.0%。

体内研究

与体内抑制c-Met磷酸化和信号转导一致，PHA-665752 处理S114移植瘤，抑制肿瘤生长，这种作用存在剂量依赖性，每天按7.5, 15, 和 30 mg/kg剂量处理，肿瘤生长抑制分别为20 %, 39% 和68%。PHA665752 处理鼠移植瘤模型，显著降低肿瘤生长，分别使NCI-H69, NCI-H441 和A549 肿瘤生长降低99%,75%, 和 59%。PHA665752也显著抑制血管新生，抑制85%以上, 降低内皮生长因子产量，提高血管生成抑制剂血小板-1的产量。

INCB28060

MB5240

JNJ38877605

MB9673

Tivantinib (ARQ 197 )

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.5586 mL

7.7929 mL

15.5858 mL

5 mM

0.3117 mL

1.5586 mL

3.1172 mL

10 mM

0.1559 mL

0.7793 mL

1.5586 mL

50 mM

0.0312 mL

0.1559 mL

0.3117 mL

体外酶实验:
使用GST融合蛋白的c-Met激酶域进行c-Met实验。在ATP和二价阳离子 (MgCl2或 MnCl210-20 mM)存在时，根据激酶肽底物和聚-glu-tyr的磷酸化，测定PHA-665752抑制c-Met的IC50值。测定作用于c-Met的线性范围(即,速率维持初始速率的时间周期), 然后在这个范围内测定动力学和IC50值。

细胞实验

• Cell lines:S114, GTL-16, NCI-H441, 和 BxPC-3
• Concentrations:溶于DMSO, 终浓度为~10 μM
• Incubation Time:18,或72小时
• Method:增殖实验中, 细胞生长在含0.1% FBS 的培养基中48小时， 然后使用不同浓度PHA-665752处理细胞。18小时后,细胞和BrdUrd温育1小时，混合，使用抗BrdUrd过氧化物酶抗体染色,然后实验板在630 nm处读数。凋亡实验中, 细胞生长在含2% FBS的培养基中，在有或无HGF (50 ng/mL) 存在时，使用不同浓度PHA-665752处理细胞72小时。72 小时后, 加入含溴化乙锭和吖啶橙的混合物,通过荧光显微镜计算凋亡细胞(明亮的橙色细胞或细胞碎片)。

动物实验

• Animal Models:携带S114 或GTL-16移植瘤的雌性无胸腺nu/nu小鼠
• Formulation:在L-乳酸（pH为4.8）和10％的聚乙二醇中配制
• Dosages:~30 mg/kg/day
• Administration:静脉注射