产品简介
Bright-FIREFLYGLO萤光素酶报告基因检测试剂盒是一种辉光型定量检测试剂盒，具有超高灵敏度和发光信号强的特点，可以满足高通量检测萤光素酶在哺乳动物细胞中的表达。区别于本公司现有报告基因检测系统，该报告基因试剂盒（PWL213）的检测优点在于反应灵敏、检测亮度高及对样品蒸发和加样误差不敏感，且采用加样-混匀-检测的操作方法，无需依赖自动进样器，并且无需弃培养液、离心等步骤，简化实验流程，满足绝大多数高通量实验需求。
反应原理如下：
产品优势
1、本产品反应灵敏、发光强度高：PWL213发光强度与竞品相当，比PWL110强50%以上，比MA0519强4-5倍。
2、本产品操作简单，检测速度快：使用本产品，无需洗涤细胞，也无需更换或去除培养液，只需把试剂盒提供的检测试剂与培养细胞等体积混合，反应2分钟后即可进行化学发光检测。
3、本产品使用灵活便捷：本产品不仅可以等体积加入到细胞培养孔中直接进行检测，也可以先使用细胞裂解液裂解并收集酶后再用本产品进行检测。
4、兼容性强：本产品兼容各种常见培养液，正常培养液中的酚红、10%以内的胎牛血清或小牛血清、2%以内的DMSO或乙醇对信号和稳定性基本没有影响，常用的盐类或金属离子在正常浓度下也基本没有影响。
萤火虫萤光素酶报告基因产品对比
美仑的三款一步法萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒的主要特点和差异如下。
如果对发光信号要求很高，并在30分钟内即可进行检测，推荐使用Bright-FIREFLYGLO；如果对发光信号和稳定性都有要求，需要批量或连续操作，推荐使用Firefly-Glo；如果对发光信号有一定要求，推荐使用Bio-FIREFLYGLO。对于常规的实验室检测，优先推荐使用Bright-FIREFLYGLO。
保存条件
未开封试剂盒-20℃保存，自生产之日起12个月有效；
溶解分装后的Bright-FIREFLYGLO检测试剂于-80℃以下避光保存6个月，或-20℃短期保存不超过一周。
运输条件
干冰运输。
注意事项
- 检测仪器选择：能够检测化学发光的仪器都适用本试剂盒的检测，但是针对相同的样品，不同检测器本底信号值和测量值均可能不同；且对于同一样本检测，不同仪器的数值不可横向比较。为防止孔间干扰，推荐使用不透明白色或黑色细胞培养板。
- 由于发光信号会受到检测环境如培养基组分、温度等影响，所以应确保同组内不同样本检测条件一致。
- 酶促反应对温度较为敏感，加样检测前务必将检测试剂以及细胞培养板平衡至室温。
- 为保证萤光素酶检测试剂稳定性，适量分装后建议-80℃以下避光保存6个月或者短期存放于-20℃不超过一周，并尽快使用，尽量避免多次反复冻融。
- 如需同时检测多个细胞培养板，请尽量确保每个细胞板加入检测溶液后孵育时间一致，再进行数据读取，以此获得最佳的检测结果。
- 萤火虫萤光素酶催化的生物发光的最强波长为560 nm。
数据展示：
（1）本公司同系列产品发光性能对比
方法：将293T细胞表达的Firefly萤光素酶，分别用本产品PWL213和本公司同系列产品（MA0519及PWL110）检测，比较发光性能。
图1. 本公司同系列产品发光性能对比
（2）竞品及本公司同系列产品发光强度对比情况
方法：将293T细胞和CHO-K1细胞表达的Firefly萤光素酶，分别用竞品及本公司同系列产品检测，比较发光强度。
结论：本公司开发的产品PWL213发光强度与竞品相当，且发光强度是本公司同系列产品PWL110的1.5倍，MA0519的5-6倍。
图2. 竞品及本公司同系列产品发光强度对比情况
（3）Firefly萤光素酶发光稳定性及线性检测
方法：分别将293T细胞和CHO-K1细胞表达的Firefly萤光素酶稀释不同倍数，检测PWL213纯酶水平发光稳定性及不同酶量线性拟合情况。
结论：
（1）产品检测半衰期为25-30min。
（2）单一时刻光强-Firefly萤光素酶浓度标曲线性良好（R2=0.999）。
图3. Firefly萤光素酶发光稳定性及线性检测
（4）细胞内Firefly萤光素酶发光稳定性及线性检测
方法：细胞培养体系下验证光强稳定性及细胞密度-光强标曲。将Firefly萤光素酶载体瞬时转入293T细胞/CHO-K1细胞，24h后分别使用PWL213检测细胞水平发光稳定性（20000个细胞/孔）及不同细胞数线性拟合情况。
结论：
（1）产品检测半衰期为25-30min。
（2）单一时刻光强-细胞数标曲线性良好（R2=0.998/0.999）。
图4. 细胞内Firefly萤光素酶发光稳定性及线性检测
（5）在哺乳动物细胞多种培养基中检测Firefly萤光素酶发光信号
方法：将Firefly萤光素酶稀释在多种培养基中，与Firefly Luciferase检测工作液1：1混合后，检测发光信号。用RPMI 1640培养基进行数据归一化。
结论：在常用培养基如：DMEM、MEM、RPMI 1640、DMEM/F12、MEM、F-12K等中都可以正常发光。
图5. PWL213在不同培养基中发光检测情况
（6）ADCC效应检测
方法：使用PWL213进行CD20抗体的ADCC效应检测。靶细胞为Raji，效应细胞为Jurkat-luc2p-NFAT-RE- FcγRIIIa-high affinity(V158)（美仑货号：PWL201），效靶细胞比例为6：1。将上述抗体和细胞混合液与Firefly Luciferase检测工作液1：1混合后，检测发光信号。
结论：CD20抗体的ADCC效应检测趋势与P品牌一致。
图6. CD20抗体的ADCC效应检测情况