Name: Meiluncell®全能细胞分离液
SKU: PWL668
Availability: InStock

产品简介

Meiluncell^®全能细胞分离液 (Meiluncell^® Density Gradient Media) 是一款经充分验证的细胞、病毒及亚细胞颗粒密度梯度离心介质，其作用原理、操作方法与Percoll™ Density Gradient Media（货号：17-0891）高度一致，是其优质等效替代产品。

本产品依托成熟的密度梯度离心原理，能够在1.0~1.3 g/mL密度区间内，温和、快速、高效地完成多种细胞类型、病毒及亚细胞组分的分离工作，适配绝大多数沉降系数大于60S的生物颗粒分离场景。

产品核心成分为聚乙烯吡咯烷酮 (PVP) 涂层改性的硅胶颗粒介质，颗粒直径为15~30 nm，游离PVP含量仅1%~2%，配方科学稳定。本产品硅胶颗粒存在天然粒径异质性，离心过程中可实现差异化速率沉降，自发形成连续、等渗的密度梯度。实验操作便捷灵活，可通过梯度混合器或高速离心机快速构建密度梯度；也可将样品与介质提前预混，在原位形成的梯度中完成分离，实现梯度构建与样品分离一步完成，单次操作即可达成分离效果，大幅简化实验流程、提升实验效率。

产品用途

适用于血液、组织等生物样本处理，可高效完成细胞、细菌、病毒、细胞器及各类亚细胞组分的分离、纯化与富集，还可有效分离完整活细胞与受损细胞及细胞碎片。

产品特点

活性保护优异：低粘度，等渗时无毒，生物相容性高，不穿透生物膜，不粘附细胞，可稳定保留生物颗粒密度与样本活性。
使用便捷高效：离心可自发形成连续密度梯度，支持大体积样本处理，操作简单、耗时短。
适配范围广泛：兼容多种常规缓冲液与培养基，可灵活调配1.0~1.3 g/mL密度梯度。
性能稳定可靠：配方优化，全面对标进口，质控严格，理化性质稳定，原液可反复高压灭菌，实验重复性佳。

物理性质及指标

外观：…………………….无色至淡黄色液体

密度：……………………1.130±0.005 g/mL

渗透压：………………….max. 25 mOsm/kg·H₂O

电导率：………………….max. 100 mS/m

pH：……………………….9.0±0.5

粘度：……………………..max. 15 cP

生产工艺

本产品使用注射用水（Water-For-Injection）配制，生产程序参考GMP管理规定，并在净化车间中完成。公司已取得ISO9001质量体系认证。

保存条件

室温下未开封储存长达5年。开启后应储存于2~8℃环境中。

运输条件

常温运输。

使用方法

请详见说明书。

实例验证数据

1.PBMC分离效果

方法：

（1）3mL 60%浓度分离工作液配制：分别使用Meiluncell^®全能细胞分离液（PWL668）和进口C品牌（17-0891）配制60%工作液。取15mL离心管，加入180μL 10×PBS（MA0016）、1.62mL分离液和1.2mL 1×PBS（MA0015）。

（2）PBMC分离及流式检测：

① 健康C57小鼠眼眶取血（加0.1% EDTA抗凝），用D-Hanks稀释至2mL；

② 在分离工作液最上层，缓慢加入1mL稀释后的全血；

③ 将混合液置于水平转子离心机中，200×g离心10min（升速、降速都为1），在工作液和血浆层之间形成一层细胞白膜；

④ 用移液枪自上而下缓慢吸走血浆层，然后再同样自上而下吸取含细胞的白膜层（约1mL）；

⑤ 加入到另一个含5mL D-Hanks的干净15mL离心管内，轻吹混匀后，400×g离心5min，弃去上清，获得细胞；如此清洗两次；

⑥ 随后，用100μL含2% BSA的D-Hanks重悬细胞。一部分转移至96孔板内，加入相应流式抗体，冰上孵育20分钟，流式上机检测CD3、CD19、CD4、CD8、CD11b、Ly6G标志物情况；一部分用7-AAD染色，流式分析收获细胞数与存活率。

结果：
（1）如图1所示，离心后，Meiluncell（PWL668）分层效果和白膜层厚度与进口C品牌（17-0891）基本一致，均能将目标细胞截留在密度梯度层以上。

图1. 分离液获取PBMC分层效果的比较

（2）流式检测结果（图2）显示，Meiluncell（PWL668）与进口C品牌（17-0891）分离所得细胞中，CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、B细胞、单核细胞和中性粒细胞等主要免疫细胞亚群均可有效检出，各亚群的构成模式及分布趋势与对照基本一致。

图2. 所分离PBMC中各细胞亚群的比例情况

（3）通过统计7-AAD流式检测结果（表1）显示，相同条件下，Meiluncell（PWL668）获得的总免疫细胞数更多，细胞存活率与进口C品牌（17-0891）一致。

表1. 所分离PBMC中各细胞亚群细胞数与存活率的比较

总免疫

细胞数

T淋巴

细胞数

B淋巴

细胞数

CD4⁺T淋巴

细胞数

CD8⁺T淋巴

细胞数

单核

细胞数

中性粒

细胞数

T淋巴

细胞存活率

其他类型

细胞存活率

进口C品牌

(17-0891)

7594

3939

1695

2270

1242

949

99.19%

98.96%

Meiluncell

(PWL668)

17950

8719

5601

5614

2657

1597

180

99.35%

98.93%

2.肝实质细胞分离效果

方法：小鼠麻醉后门静脉先后灌流 EGTA液、胶原酶IV消化液；摘取肝脏获取肝细胞悬液，过筛，4℃ 80×g离心5min取沉淀得到粗肝细胞，用D-Hanks重悬；将肝细胞悬液与35%浓度分离工作液混匀，4℃ 600×g离心10min（升速、降速都为1）；离心后取白膜层细胞，洗涤重悬；取部分细胞进行7-AAD染色，流式分析收获细胞数与存活率，剩余细胞铺板，于37℃培养箱培养，次日观察贴壁情况。

结果：如图3所示，离心后Meiluncell（PWL668）分层效果和白膜层厚度与进口C品牌（17-0891）基本一致；通过统计7-AAD流式检测结果显示，相同条件下，Meiluncell（PWL668）获得的肝实质细胞数更多，细胞存活率与进口C品牌（17-0891）一致；次日细胞贴壁数量两者相近，细胞状态良好。

图3. 分离液获取肝实质细胞分层效果与细胞状态的比较

3.肝非实质细胞分离效果

方法：小鼠麻醉后门静脉先后灌流 EGTA液、胶原酶IV消化液；摘取肝脏获取肝细胞悬液，过筛，4℃ 80×g离心5min取上清，4℃ 400×g离心5min取沉淀得到粗肝非实质细胞，用D-Hanks重悬；15mL离心管中依次缓慢加入66%浓度分离工作液→33%浓度分离工作液→细胞悬液，4℃ 1060×g离心10min（升速、降速都为1）；离心后取中间白膜层细胞，洗涤重悬；取部分细胞进行7-AAD染色，流式分析收获细胞数与存活率，剩余细胞铺板，于37℃培养箱培养，次日观察贴壁情况。

结果：如图4所示，离心后Meiluncell（PWL668）分层效果和白膜层厚度与进口C品牌（17-0891）基本一致；通过统计7-AAD流式检测结果显示，相同条件下，Meiluncell（PWL668）获得的肝非实质细胞数和存活率均与进口C品牌（17-0891）相近；次日细胞贴壁数量两者没有明显差异，细胞状态良好。

图4. 分离液获取肝非实质细胞分层效果与细胞状态的比较

4.骨髓中性粒细胞分离效果

方法：取小鼠股骨、胫骨，冲洗制备骨髓单细胞悬液，4℃ 230×g离心6min收集细胞，洗涤重悬；利用注射器和20cm长针头，伸到离心管底部，按52%、64%、72%的顺序，依次向离心管底加入分离工作液，各密度层分界线需肉眼可见；上层缓慢加入细胞悬液，4℃ 1060×g离心10min（升速、降速都为1）；收集第三层中性粒细胞白膜层，洗涤后冰上孵育流式抗体，流式上机检测CD11b、Ly6G标志物情况；一部分用7-AAD染色，流式分析收获细胞数与存活率。

结果：如图5所示，离心后Meiluncell（PWL668）分层效果和白膜层厚度与进口C品牌（17-0891）基本一致；流式检测结果显示，所得细胞中，中性粒细胞的数量占比两组几乎无差别，高于未纯化的细胞混悬液；通过统计7-AAD流式检测结果显示，相同条件下，Meiluncell（PWL668）获得的中性粒细胞数和存活率均与进口C品牌（17-0891）相近。

图5. 分离液获取骨髓中性粒细胞分层效果、亚群比例、细胞数和存活率的比较

5.小肠免疫细胞分离效果

方法：配制 100%、40% Percoll 等渗工作液，配制 37℃保温的含 DTT、EGTA 细胞提取液。取小鼠小肠，去除脂肪，冲洗剪碎；经预热提取液 37℃ 15 min两次振荡消化，过筛合并上清，4℃ 400×g离心5min收集细胞沉淀；加入40%浓度分离工作液，混匀，4℃ 600×g离心10min（升速、降速都为1）；收集管底细胞层，洗涤后于冰上孵育流式抗体，流式上机检测CD3、CD19、CD4、CD8标志物情况，并统计收获细胞数。

结果：如图6所示，离心后Meiluncell（PWL668）管底细胞层厚度与进口C品牌（17-0891）基本一致；流式检测结果显示，所得细胞中，T细胞、B细胞、CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞的数量占比两组几乎无差别；Meiluncell（PWL668）收获的细胞数比进口C品牌（17-0891）稍多。

图6. 分离液获取小肠免疫细胞分层效果、亚群比例和细胞数的比较

6.自发形成的密度梯度情况

方法：分别用Meiluncell^®全能细胞分离液（PWL668）和进口C品牌（17-0891）配制50%工作液，30000×g离心15min，自上而下每0.4-0.7mL取一次样品，用密度计测其密度，比较自发形成的密度梯度情况。

结果：如图7所示，Meiluncell（PWL668）能够自发形成稳定的梯度密度层，其密度分布与进口C品牌（17-0891）相近。

图7. 分离液自发形成密度梯度分布情况

注意事项

本产品离心后易在离心管底、管壁残留二氧化硅沉淀，干燥后难以清洗，实验结束后需立即水洗设备；优先选用聚碳酸酯（PC）材质离心管。
本产品在pH 5.5-10.0区间内性能稳定；pH＜5.5、含Ca²⁺、Mg²⁺等二价阳离子或高温环境，均会诱发胶体二氧化硅胶凝失稳，实验需规避低pH、高盐及含二价离子体系。
所有硅胶胶体在长期储存时形成聚集体是一种固有趋势。这些聚集体可能在某些批次的产品中观察到，表现为管底的轻微沉淀物或密度为1.04至1.05 g/mL的淡白色条带。该条带可能在离心机形成梯度时或预形成梯度的低速离心过程中形成。聚集的硅胶不会干扰生物颗粒的分离，且几乎所有细胞和细胞器在分离液中的浮力密度均大于1.05 g/mL。对于大多数细胞、病毒和细胞器的分离，从梯度材料中带出的任何二氧化硅聚集体均可忽略不计。
本产品为无菌包装，请注意无菌操作，防止污染。如果有额外的灭菌需求，仅可对Meiluncell^®全能细胞分离液原液进行121℃、30分钟高压灭菌（因为含盐、蔗糖体系易引发产品胶凝或焦糖化），不可采用0.22μm过滤除菌。灭菌过程中需减少产品与空气接触，防止气液界面生成固体颗粒，建议使用窄口瓶封装；若产生颗粒，可通过0.45μm过滤或500×g低速离心5分钟去除。灭菌后若出现液体体积损耗，可补充对应体积蒸馏水，不会改变产品密度。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅限科研使用。

Documents

说明书

MA0083	生理盐水	500mL
PWL242-1	1.5M NaCl溶液（10×生理盐水，无菌）	100mL
PWL243-1	2.5M 蔗糖溶液（无菌）	100mL
PWL244-1	0.25M 蔗糖溶液（无菌）	100mL
MA0015-1	PBS(1X),细胞培养级	500mL
MA0015-2	PBS(1X),细胞培养级	500mL×10瓶/箱
MA0016	PBS(10X),细胞培养级	500mL
PWL100-1	人外周血淋巴细胞分离液；样本密度分离液（内毒素≤0.03EU/ML）	200mL
MA0633	大鼠外周血淋巴细胞分离液试剂盒(改良型)	200mL/盒
MB0908-1	人骨髓间充质干细胞分离液	200 mL/kit
MB0911-1	人外周血淋巴细胞分离液（内毒素<0.5EU）	200 mL
MB13036-1	小鼠外周血单个核细胞分离液	200mL/kit
MB0909-1	小鼠外周血淋巴细胞分离液KIT	200 mL