产品描述
脂滴（Lipid droplets，LDs）又称脂质体或油体，由磷脂单分子层及中性脂（主要包括甘油三酯和胆固醇酯）组成的疏水核心构成，其大小差别很大，直径从40nm至100μm不等。脂滴是细胞内中性脂的主要贮存场所，能够沿着细胞骨架运动，并与其它细胞器相互作用，在能量存储、脂类代谢与存储、膜转运、蛋白降解以及信号传导过程中起着重要的作用。脂滴的异常也与肥胖、脂肪肝、心血管疾病及糖尿病等多种代谢性疾病密切相关。
荧光法脂滴检测试剂盒(红色,Nile Red)，即Lipid Droplets Fluorescence Assay Kit(Red,Nile Red)，是一种基于红光探针尼罗红（Nile Red；Nile blue oxazone；CAS:7385-67-3）来检测细胞内脂滴的试剂盒。尼罗红在水和其它极性溶剂中几乎无任何荧光，一旦与甘油三酯等中性脂肪结合，便会发出明亮的橙红色荧光，Ex/Em=552nm/636nm，适配常规TRITC滤光片，方便荧光显微镜、共聚焦显微镜观测；亦可在Ex/Em=585nm/535nm条件下呈现金黄色荧光，该通道细胞膜磷脂非特异性信号更低，但整体荧光强度弱于红色通道。Hoechst 33342是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光，可用于细胞核染色，Ex/Em=346nm/460nm。
本试剂盒包含以下主要组分：Nile Red（1000×）、Hoechst 33342（1000×）和Assay Buffer。本试剂盒适用于荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪等荧光检测系统。通过这些检测系统，可以清晰地观察到细胞内脂滴的分布和数量。
对于96孔板中的样品，按照每孔使用100μL染色液计算，本试剂盒的小包装MA1800-1和中包装MA1800-2分别可以进行1000次和5000次检测；如果用于流式细胞仪检测，按照每个样品的检测体系体积为0.5mL时，本试剂盒的小包装MA1800-1和中包装MA1800-2可以进行200次和1000次检测；对于6孔板中的贴壁培养细胞样品，按照每孔使用1mL染色液计算，本试剂盒的小包装MA1800-1和中包装MA1800-2可以进行100次和500次检测。
产品优势
- 操作简便快速：最快20分钟内即可完成检测。
- 特异性强：Nile Red能特异性地标记脂滴中的中性脂肪，发出明亮的橙红色荧光。
- 荧光稳定性佳：Nile Red在常规生理条件下荧光信号稳定。
- 适用范围广：兼容活细胞染色和固定细胞染色，支持多重荧光共染。
- 适配多种检测系统：适用于荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪等多种荧光检测系统。
保存条件
-20ºC避光保存，自生产之日起12个月有效。Assay Buffer短期内可暂存2-8ºC，一个月内有效。
运输条件
湿冰运输。
注意事项
- 第一次使用请将本品分装并于-20℃冻存，避免反复冻融。建议根据单次用量分装密封保存。
- 由于Nile Red的发射光谱范围广，所以尽量避免其它荧光的染色和检测。如果一定要进行双重染色，由于Nile Red在激光照射下很快淬灭，可以先检测Nile Red，并在淬灭后再进行其它荧光的检测。
- Nile Red的工作浓度、细胞量、孵育温度和时间等可根据所使用的细胞进行适当摸索和优化，例如Nile Red的浓度可在0.2×~2×之间适当调整。
- Nile Red在激光照射下易发生淬灭，因此需要在保证荧光亮度的前提下尽可能降低染料使用浓度，降低荧光显微镜激发光强度，缩短拍照时间。
- 为获得准确试验结果，建议样品在染色后1小时内进行分析。
- 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
- Assay buffer应在无菌环境中取用，否则可能会被微生物污染而影响使用效果，甚至无法继续使用。
- 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
实验数据
方法：将生长状态良好的A549细胞接种于96孔板中，使用含有300μM油酸的细胞完全培养液诱导细胞形成脂滴模型，孵育过夜。次日，利用荧光法脂滴检测试剂盒(红色,Nile Red)分别对脂滴模型细胞和正常细胞进行染色。
结论：正常A549细胞内无明显的脂滴聚集现象，因此经染色后仅呈现较弱的绿色荧光，主要是细胞膜上脂类的染色；而油酸诱导后的细胞（脂滴模型）内有很明显的脂滴聚集，细胞内脂滴被Nile Red染成明亮的红色荧光。
图1. 荧光法脂滴检测试剂盒(红色,Nile Red)检测A549细胞内脂滴的效果