PS48

PS48是一种PDK1激活剂，AC50为 8 μM。

靶点&IC50

AC50: 8 μM (PDK1)

体外研究

PS48激活全长PDK1（His-PDK1-FL）和PDK150-359 [Tyr288Gly; Gln292Ala]（His-PDK1dm），其AC50s（达到最大激活的50％所需的浓度）为7.95±0.2和10.0±10 2.0μM。 PS48以1：1化学计量与PDK150-359结合并且在微摩尔范围内具有结合亲和力（Kd =10.3μM）。 PDK1激活剂PS48具有逆转雷公藤内酯醇（TP）体外细胞增殖抑制作用的能力。 PS对细胞数目的抑制作用被PS48显着逆转。 TP显着增加G0-G1期细胞比例，降低G2-M期和S期细胞比例。 但是，TP对细胞周期分布的影响全部被PS48逆转。 另外，高糖（HG）处理的人肾小球系膜细胞（HRMCs）中TP对PDK1 / Akt / mTOR通路的抑制也被PS48逆转，以及Ki-67和增殖细胞核抗原（PCNA）。

BX-795

MB3973

BX-912

MB3972

GSK2334470

CL-11214

KP372-1(PDK1/Akt/Flt Dual Inhibitor)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.4874 mL

17.4368 mL

34.8736 mL

5 mM

0.6975 mL

3.4874 mL

6.9747 mL

10 mM

0.3487 mL

1.7437 mL

3.4874 mL

1 mM

3.4874 mL

17.4368 mL

34.8736 mL

PDK1活性测试是用T308Tead作为PDK1的底物进行的。简单地，在室温下（22°C），在20μL的混合物中进行PDK1活性测定，该混合物含有50 mM TrIs pH 7.5、0.05 mg/ml BSA、0.1%β-巯基乙醇、10 mMgCl 2、100μm[γ32P] ATP（5-50CPM/Pmol）、0.003% BRIJ、150～500 ng PDK1和T308TIAL（0.1～1 mm）。在适当的情况下，用EP运动5070在P18-磷酸纤维素纸上发现96孔格式和4μl等分试样，在0.01%磷酸中洗涤，干燥，然后用磷光成像技术进行曝光和分析。活动测量以重复或少于10%倍的重复进行。实验至少重复两次。

细胞实验

人肾系膜细胞（HMCs）用1640种培养基培养，在5%℃下含有10%胎牛血清37°C。在无血清培养基中，用D-葡萄糖在正常（5.5毫米）或高（25毫米）浓度培养细胞。D-甘露醇（25毫米）用于渗透压的控制。TP在0.01% DMSO中重组，用培养基新鲜稀释至10μg/L。为了确定PDK1在TP增殖抑制中的特异作用，在TP治疗后应用5μm PS48（MeDeCm Express，美国）。MTT法检测细胞增殖。HRMCs以1×105/ml的密度接种到96孔板中。在用不同化合物孵育12, 24, 48和72小时后，将20 UL MTT（5 mg/ml）加入到每个孔中。然后细胞再培养2小时，然后用DMSO（150 UL/WELL）溶解。当FrMAZAN晶体完全溶解时，在570 nm处测量光密度（OD）。计算每组六威尔斯的计算平均OD值。