蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA，100X DMSO储液)

本蛋白酶抑制剂混合物(Protease Inhibitor Mix)为经优化和测试的用于常规细胞或组织蛋白提取等的蛋白酶抑制剂混合物，含有6种广谱蛋白酶抑制剂（组成请见下表），保护蛋白完整性。

应用领域

蛋白纯化、蛋白免疫印迹、免疫(共)沉淀(‌CoIP)、蛋白质Pull-down实验、免疫荧光、免疫组织化学、激酶测定等。

保存条件

-20℃保存，自生产之日起12个月有效。

运输条件

湿冰运输。

使用方法

请详见说明书。

注意事项

1. 避免反复冻融，第一次使用后，可按照每次使用量分装冻存，并应在临使用前添加到裂解液等适当溶液中。
2. 本产品中含有的蛋白酶抑制剂对人体有害，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 传统的蛋白酶抑制剂(E-64, AEBSF, bestatin, leupeptin and aprotinin)是不能够抑制某些去泛素化(DUB)蛋白酶(例如ATAXIN-3)的功能的。(参考文献: Neil D. Rawlings, Guy Salvesen et al. Handbook of Proteolytic Enzymes,Vol.1, 2012)

常见问题

问题1：为什么要用蛋白酶抑制剂混合物？

回答1：蛋白酶抑制剂混合物是低毒、全面的蛋白保护试剂，最大限度地保护蛋白，使其免于被蛋白酶降解。目前生物学研究日渐深入，更多地将目标锁定为细胞中较为微量的蛋白，如信号通路蛋白、受体蛋白，采用‌CoIP、Pull-down等方法获得样品。对于这些微量的珍贵样品，混合物能取得最佳的保护效果，比单一的抑制剂（如PMSF）更为可靠。

问题2：蛋白酶抑制剂混合物能否稀释使用？

回答2：蛋白酶活性抑制效果和很多因素有关，如目标蛋白降解的难易程度、蛋白酶的浓度、活性、抑制剂的浓度都会影响最后的保护效果。我们的蛋白酶抑制剂混合物采用经典浓度配比，确保对不同类型的蛋白酶都有充分的抑制效果。为了取得最好的保护效果，使用时应按照规定比例稀释，这是此类产品的共性。但实际产品里，不同厂商的标示清楚程度不同，需要仔细辨读，以免影响实验结果。在部分实验室实际应用中，也存在对于已知蛋白的成熟操作流程中减量使用混合物的情况，本产品可对照同类产品的相同比例稀释使用，可以保证保护效果。

问题3：实验中经常用PMSF来保护蛋白，蛋白酶抑制剂混合物和它比有什么优势？

回答3：PMSF是经典的丝氨酸蛋白酶抑制剂，以前被广泛应用于细胞裂解纯化蛋白过程。但由于PMSF在很多方面存在明显的缺点，逐步被保护效果更好，更安全的蛋白酶抑制剂混合物所取代。PMSF的毒性较高，因此在蛋白酶抑制剂中选用AEBSF作为其替代品。AEBSF的半致死量是2834mg/kg，而PMSF是200mg/kg，AEBSF安全阈值超过PMSF十四倍，同时有着相当的抑制效果，对于很多丝氨酸蛋白酶的抑制比PMSF更为迅速。PMSF的另一个缺点是易降解失效，它在水溶液中的半衰期是30min，在细胞裂解过程中很容易失效。而蛋白酶抑制剂混合物不但保护更加全面，而且效果更加持久。

问题4：我应该选择哪种类型的蛋白酶抑制剂混合物， 片剂还是溶液？

回答4：在选择混合物产品类型的时候我们需要注意一些细节问题。两种类型的产品都含有添加物。片剂中含有若干种未经公开的成分， 而溶液型产品中含有溶剂成分DMSO。一般来说这些添加物是不会影响产品效果的。在工业生产中，溶液型产品与片剂相比，需要的加工步骤少，因而质量好、价格低。而片剂产品能够在4度储存而不需要零下20度。我们推荐使用溶液型产品，价格更低，有效的抑制剂成分含量更高，便于直接分装。

问题5：DMSO会不会对我的实验造成影响？

回答5：DMSO会影响实验结果的可能性很低。在生物科学领域，DMSO被作为很多生物活性物质的溶剂，比如在蛋白结晶和免疫共沉淀等要求较高的实验体系中，DMSO也有应用。DMSO在室温下性质稳定，在低温条件下DMSO还是优秀的细胞冷冻保护剂。

问题6：用了混合物，结果仍然不好是怎么回事？

回答6：蛋白酶抑制剂混合物的作用是保护蛋白免受蛋白酶降解的威胁，维持蛋白的完整性，减少降解损失。对于绝大多数蛋白，混合物都有很好的效果。如果还是出现蛋白得率低的情况，需要谨慎检查实验步骤和方案设计，最大限度发挥混合物作用，减少导致蛋白降解的环节。例如，细胞处理前，先要将裂解体系完全准备好，预先加入混合物并混匀，将要破碎的细胞收集完后或从冰箱中取出后，立即加入准备好的裂解液中，给予蛋白全程保护。