CEP-32496

CEP-32496是一种高度有效的BRAF(V600E/WT)和c-Raf抑制剂，Kd为14 nM/36 nM和39 nM，适度有效作用于Abl-1， c-Kit， Ret， PDGFRβ和VEGFR2，对MEK-1， MEK-2， ERK-1和ERK-2具有微弱的亲和力。

特性

对BRAF（V600E）突变型和相关的c-Raf具有高的结合亲和力，而对MAPK通路的其它关键激酶，包括MEK-1，MEK-2，ERK-1和ERK-2无显著的亲和力。

靶点

体外研究

CEP-32496抑制A375细胞(BRAFV600E) 增殖， EC50为78 nM。CEP-32496作用于肿瘤细胞系，对表达突变型BRAF的A375, SK-MEL-28, Colo-205, Colo-679, 和HT-144细胞比表达野生型BRAF的HCT116, Hs578T, LNCaP, DU145, 和PC-3细胞具有更敏感的细胞毒性作用。CEP-32496作用于人类黑色素瘤（A375）和结肠直肠癌（Colo-205）细胞系，抑制MAPK/MEK磷酸化，IC50分别为 78 nM 和 60 nM。

体内研究

CEP-32496处理小鼠，狗，猴和人肝微粒制品，具有良好的稳定性，测量的内在清除率为<23 (μL/min)/mg，t1/2为>60 分钟。CEP-32496按30 mg/kg剂量口服处理给药携带Colo-205移植瘤的小鼠模型，每天两次，肿瘤生长停滞，部分肿瘤消退(PRs)的发生率为40％，而按100 mg/kg剂量处理，则肿瘤生长停滞，部分肿瘤消退(PRs)的发生率为80％。CEP-32496按30 mg/kg剂量口服处理肿瘤裂解物，每天两次，在给药时间点厚2小时和6小时，分别抑制50％和75％归一化的pMEK，而按55 mg/kg剂量处理给药携带Colo-205移植瘤的小鼠模型， 抑制57％到75％pMEK。CEP-32496处理多个临床前物种具有良好的口服生物利用度（大鼠，狗和猴> 95％）。CEP-32496(100 mg/kg)处理携带BRAF(V600E)结肠癌移植瘤的裸鼠，抑制pMEK和pERK，使肿瘤持续生长停滞和衰退。

达拉菲尼,达帕菲尼

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9325 mL

9.6626 mL

19.3252 mL

5 mM

0.3865 mL

1.9325 mL

3.8650 mL

10 mM

0.1933 mL

0.9663 mL

1.9325 mL

50 mM

–

–

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结合实验:
结合反应在室温下进行1小时，通过捕获固定化的亲和配体，测定未与实验化合物结合的激酶组分，通过定量PCR检测进行定量分析。分别测定CEP-32496作用于每种激酶的效果。使用11种连续3倍稀释液测定Kd值，并表示为实验按一式两份进行的平均值。各个值之间的变异性小于2倍。

细胞实验：

• Cell lines:A375 细胞系
• Concentrations:78 nM
• Incubation Time:72 小时
• Method:细胞按每孔104个细胞接种在含10%胎牛血清的DMEM培养基中进行培养。使用PBS洗涤细胞，更换为含0.5%血清的DMEM培养基，温育过夜。加入不同浓度CEP-32496，DMSO 终浓度为0.5%，温育72小时。温育末期，加入Cell Titer Blue，再温育3小时。使用SoftMax Pro (激发波长为560 nm，发射波长为590 nm) 测量荧光信号的强度，对剩余的存活细胞进行定量。使用含有Igor Pro 的9点曲线推算IC50值，并且表示为实验按一式两份进行的平均值。各个值之间的变异性小于2倍。

动物实验：

• Animal Models:携带Colo-205移植瘤的小鼠模型
• Formulation:22% HPβCD
• Dosages:100 mg/kg
• Administration:口服饲喂