PF-04691502

PF-04691502是一种ATP竞争性的PI3K(α/β/δ/γ)/mTOR双重抑制剂，在无细胞试验中Ki为1.8 nM/2.1 nM/1.6 nM/1.9 nM和16 nM，对Vps34， AKT， PDK1， p70S6K， MEK， ERK， p38 和 JNK 几乎没有作用活性。

靶点

体外研究

在生化检测中，PF-04691502有效抑制重组I类PI3K和mTOR，并抑制野生型PI3K γ，δ，或突变体PI3Kα介导的鸟类成纤维细胞的转化。在PIK3CA-突变型和PTEN-缺失的癌症细胞系中，PF-04691502减少AKT T308和AKT S473 (IC(50)分别为7.5-47 nM和3.8-20 nM)磷酸化，并抑制细胞增殖(IC(50) 为179-313 nM)。独立于PI3K的营养物刺激试验中，PF-04691502抑制细胞中mTORC1活性，IC(50)为32 nM，并抑制PI3K和mTOR下游效应分子，包括AKT，FKHRL1，PRAS40，p70S6K，4EBP1，和S6RP的活化。短期暴露于PF-04691502，主要抑制PI3K，而对mTOR的抑制会持续24到48小时。PF-04691502诱导细胞周期G(1)阻滞，并伴随p27 Kip1的上调和Rb的减少。

CUDC-907

MB5316

CZC24832

MB3215

Duvelisib (IPI-145)

MB3886

GDC-0032

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3503 mL

11.7514 mL

23.5029 mL

5 mM

0.4701 mL

2.3503 mL

4.7006 mL

10 mM

0.2350 mL

1.1751 mL

2.3503 mL

50 mM

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激酶试验:
对ATP竞争性抑制的荧光偏振试验如下进行：mPI3Kα稀释溶液(90 nM)在新鲜试验缓冲液(50 mM Hepes pH 7.4，150 mM NaCl，5 mM DTT，0.05% CHAPS)中制备，并放置在冰上。酶反应包含0.5 nM 小鼠PI3Kα (从昆虫细胞中纯化的p110α/p85α 复合物)，30 μM PIP2，PF-04691502 (0, 1, 4, 和8 nM)，5 mM MgCl2，和ATP (0–800 μM)的2倍连续稀释物。终二甲基亚砜浓度为2.5%。反应通过加入ATP起始，30分钟后，用10 mM EDTA终止。在检测板中，15 μL检测器/探针混合物试验缓冲液，包含480 nM GST-Grp1PH域和12 nM TAMRA标记的荧光PIP3，与15 μL激酶反应混合物混合。在LJL Analyst HT上读数之前，将板摇晃3分钟，并培育35到40分钟。

细胞实验：

• Cell lines:BT20，U87MG，和 SKOV3 细胞
• Concentrations:0-3 mM
• Incubation Time:3天
• Method:BT20，U87MG，和SKOV3细胞以3,000细胞/孔接种在含有10% FBS生长培养基的96孔培养板。将细胞培养过夜，并用DMSO (0.1%终浓度)或连续稀释的化合物处理3天。加入终浓度为0.1 mg/mL的Resazurin。将板在37 °C，5% CO2中培养3小时。荧光信号在530 nm激发波长，590 nm发射波长下读取。IC50值通过绘制荧光强度相对于药物浓度的非线性曲线进行计算。

动物实验：

• Animal Models:LSL-KrasG12D杂合子小鼠(B6.129-Krastm4Tyj)和 Ptendel小鼠 (c;129S4-Ptentm1Hwu/J)，原位移植的卵巢肿瘤
• Formulation:0.5% 甲基纤维素
• Dosages:每天 7.5 或 10 mg/kg
• Administration:口服喂食