PP121

PP-121是多靶点PDGFR, Hck,mTOR, VEGFR2, Src和Abl抑制剂，IC50分别为2 nM, 8 nM, 10 nM, 12 nM, 14 nM和18 nM，也抑制DNA-PK，IC50为60 nM。

靶点

PDGFR

Hck

mTOR

VEGFR2

Src

Abl

IC50

2 nM

8 nM

10 nM

12 nM

14 nM

18 nM

体外研究

PP-121在酪氨酸激酶和PI3Ks而不是丝-苏氨酸激酶保守的疏水性口袋中选择性相互作用。PP-121在Src处与Glu310形成氢键，有效取代催化赖氨酸的结构作用，且导致产生螺旋C的顺序和活性构象的稳定性。PP-121抑制一些PI3Ks，包括p110α, DNA-PK和mTOR，IC50分别为52 nM, 60 nM和10 nM。PP-121抑制一些酪氨酸激酶，包括Bcr-Abl, Hck, Src, VEGFR2和PDGFR，IC50分别为18 nM, 8 nM, 14 nM, 12 nM和2 nM。PP-121浓度为0.04到10 µM时，作用于两种胶质瘤细胞系，U87和LN229。有效抑制Akt, p70S6K和S6磷酸化，这种作用存在剂量依赖性。PP-121浓度为0.04到10 µM时，通过直接对PI3Ks和mTOR抑制，而有效抑制一系列肿瘤细胞增殖。PP-121作用于LN220, U87和Seg1细胞，诱导细胞在G0/G1期停滞。PP-121浓度为0.08到20 µM时，作用于转化v-Src(Thr338)的NIH3T3细胞，抑制v-Src诱导的酪氨酸磷酸化。PP-121浓度为2.5 µM时，作用于转化v-Src(Thr338)的NIH3T3细胞，恢复肌动蛋白纤维的染色。PP-121浓度低到40 nM时，作用于表达C634W致癌基因Ret突变35的TT甲状腺癌细胞，抑制Ret自磷酸化。PP-121抑制TT甲状腺癌细胞增殖,IC50为50 nM。PP-121作用于人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，抑制VEGF刺激的细胞增殖，IC50为41 nM。PP-121直接抑制Bcr-Abl诱导的酪氨酸磷酸化，作用于K562细胞，导致产生药物诱导的凋亡，而作用于表达Bcr-Abl的BaF3细胞，诱导凋亡，且诱导细胞周期停滞。

Telatinib

MB3947

CP-673451

MB5074

利尼伐尼；ABT869

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.1313 mL

15.6563 mL

31.3126 mL

5 mM

0.6263 mL

3.1313 mL

6.2625 mL

10 mM

0.3131 mL

1.5656 mL

3.1313 mL

50 mM

0.0626 mL

0.3131 mL

0.6263 mL

激酶检测:
在 10 µM ATP, 2.5 µCi γ-32P-ATP 和底物存在时，纯化的激酶域与PP-121的2或4倍稀释液（浓度范围为1nM-50 µM）或0.1% DMSO（空白对照）温育。通过点样到硝酸纤维素膜或磷酸纤维素膜上终止反应，然后冲洗膜5–6次，移除未结合的放射性，然后烘干。通过磷光法量化放射性，然后使用 Prism软件，拟合数据到S型剂量反应，而计算IC50值。

细胞实验

• Cell lines:U87, LN229, NIH3T3, HUVECs, BaF3 和 TT 甲状腺癌细胞
• Concentrations:0.04 μM – 20 ?
• Incubation Time:24-72 小时
• Method:用于western blot分析时,细胞生长在 12孔板中，然后使用指定浓度 PP-121 或0.1% DMSO处理。处理的细胞裂解，裂解物使用SDS-PAGE溶解，然后转移到硝酸纤维素上进行印迹。细胞增殖研究中，细胞生长在96孔板上，使用PP-121的 4倍稀释液 (10 µM-0.040 μM) 或0.1% DMSO处理。72小时后，使用 Resazurin钠盐(22 µM) 处理细胞，然后测定荧光。使用Prism软件测定IC50值。细胞增殖研究中，涉及计数单细胞，非粘着细胞按低密度(3–5% 汇合度)接种，然后使用PP-121(2.5 µM)或 0.1% DMSO处理。每天细胞稀释到台酚蓝中，然后使用血球计数仪测定活细胞数。细胞凋亡和细胞周期研究中，使用指定浓度 PP-121或0.1% DMSO处理细胞24–72小时。使用AnnexinV-FITC对细胞进行染色，或使用乙醇固定，然后使用碘化丙啶染色。 使用 FacsCalibur 流式细胞仪分开细胞群，使用CellQuest Pro软件收集数据，然后使用 ModFit 或FlowJo软件分析。