产品简介：
KU-0063794 是一种有效的，特异性的mTOR抑制剂，能够抑制mTORC1和mTORC2，IC50值均约为 10 nM。
分子式：C25H31N5O4 分子量：465.54
别名：Benzenemethanol, 5-[2-[(2R,6S)-2,6-dimethyl-4-morpholinyl]-4-(4-morpholinyl)pyrido[2,3-d]pyrimidin-7- yl]-2-methoxy-, rel
物理性状及指标：
外观：………………浅黄色至黄色粉末
溶解性：……………DMSO ：16 mg/mL (34.36 mM)；Water Insoluble；Ethanol Insoluble
含量：………………>98%
储存条件：
-20℃，避光防潮密闭干燥
运输条件：
2~8℃运输
| 产品描述 | KU-0063794是一种有效的，高度特异性的，作用于mTORC1和mTORC2的双重mTOR抑制剂，在无细胞试验中IC50约为~10 nM；对PI3Ks没有作用。 |
|---|---|
| 靶点 |
mTORC1
(Cell-free assay) ~10 nM mTORC2
(Cell-free assay) ~10 nM |
| 体外研究 | 与mTOR抑制剂PP242相比, KU-0063794高特异性作用于mTOR,而对PI3Ks或其他76种激酶则无作用活性。30 nM KU-0063794作用于HEK-293细胞，通过抑制疏水基团(Thr389)磷酸化，及随后的T-环残基(Thr229) 磷酸化，而快速切除S6K1活性。300 nM KU-0063794作用于IGF1刺激的血清饥饿处理的 HEK-293细胞，抑制~90%S6K1活性。KU-0063794 为 100-300 nM时，也完全抑制氨基酸诱导的S6K1和 S6蛋白磷酸化。与S6K1类似, KU-0063794抑制mTORC1在 Ser2448位点磷酸化，也抑制mTORC2 在 Ser22481位点磷酸化，这种作用存在剂量和时间依赖性。在血清存在时，或者IGF1刺激的情况下, KU-0063794抑制Akt 活性，或者Akt在 Ser473和 Thr308（意外的）位点磷酸化，也抑制Akt底物 PRAS40 在 Thr246位点，GSK3α/GSK3β在 Ser21/Ser9位点及Foxo-1/3a 在 Thr24/Thr32位点磷酸化，以上作用存在剂量依赖性。KU-0063794而不是 Rapamycin 抑制SGK1活性和 在Ser422位点磷酸化，也抑制其生理底物NDGR1，与抑制S6K1 和Akt磷酸化程度相似，这种作用存在剂量依赖性，然而KU-0063794 不抑制佛波酯诱导的ERK 或RSK磷酸化和RSK激活。与Rapamycin相比, KU-0063794更有效诱导4E-BP1在 Thr37, Thr46和 Ser65位点完全去磷酸化。KU-0063794抑制野生型和mLST8-缺陷型MEFs细胞生长，也诱导细胞周期停在G1期，比Rapamycin效果更显著。 |
| 体内研究 | Ku0063794在肾脏上皮肾细胞癌的临床前模型中，抑制肿瘤生长和mTOR信号。然而，在动物研究中，Ku0063794没有temsirolimus有效，可能的原因是temsirolimus对肿瘤的微环境有重要的作用，能在异种移植瘤中减少血管生成，而Ku0063794无此效果。经Temsirolimus处理的肿瘤组织比Ku0063794处理的肿瘤组织更少地表达VEGF和PDGF。 |
用途及描述：
科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面，严禁用于人体。KU-0063794 是一种有效的，特异性的mTOR抑制剂，能够抑制mTORC1和mTORC2， 对PI3Ks没有作用。本品适用于该领域相关科研实验。
| 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1480 mL | 10.7402 mL | 21.4804 mL |
| 5 mM | 0.4296 mL | 2.1480 mL | 4.2961 mL |
| 10 mM | 0.2148 mL | 1.0740 mL | 2.1480 mL |
| 50 mM | – | – | – |
| 激酶实验 | mTOR 复合物激酶检测实验: HEK-293细胞新鲜溶解在Hepes裂解液中。溶解产物(1-4 mg) 通过与5-20 μL G蛋白的琼脂糖凝胶结合免疫前抗体IgG温育而预先清除。裂解抽提物与5-20 μL G蛋白的琼脂糖凝胶结合的 5-20 μg抗Rictor或抗Raptor抗体的 免疫前抗体IgG温育。所有抗体共价结合到蛋白G蛋白琼脂糖凝胶上。在振动转载台上4oC下进行 免疫沉淀1小时。使用Hepes 裂解液冲洗免疫沉淀物四次，随后使用Hepes激酶buffer冲洗两次。使用 Raptor免疫沉淀物磷酸化 S6K1, 两次冲洗的初始步骤中，buffer 含0.5 M NaCl，确保最佳激酶活性。血清饥饿的 HEK-293细胞中分离的GST-Akt1与PI-103(1 μM 进行 1 小时)温育。从血清饥饿的HEK-293 细胞中纯化的GST-S6K1与Rapamycin (0.1 μM进行1小时)温育。加入0.1 mM ATP和 10 mM MgCl2，在不同浓度KU-0063794和GST-Akt1 (0.5 μg)或GST-S6K1 (0.5 μg)存在时，开始mTOR反应。反应在 30oC下在振动转载台上进行30分钟，然后加入SDS样本缓冲液终止反应。反应混合物在0.22-μm-孔径大小 Spin-X过滤器上过滤，样本进行电泳处理，然后使用指定抗体进行免疫印迹分析。 |
|---|---|
| 细胞实验 |
使用KU-0063794 处理细胞 24, 48, 和72 小时，每24小时更换一次培养基，加入新鲜溶解的KU-0063794。为了测量细胞生长，使用PBS冲洗细胞一次，然后与4% (v/v) 多聚甲醛在 PBS混合15分钟。用水冲洗一次后，使用溶于 10% 乙醇的0.1% 结晶紫对细胞染色20分钟，然后用水冲洗三次。 使用0.5 mL 10% (v/v) 乙酸从细胞中抽提结晶紫20分钟。然后洗脱液在水中按1:10稀释，然后在 590 nm 处测量吸光值。为了测量细胞周期分布，通过胰蛋白酶化作用收集细胞，然后在PBS中冲洗一次，再悬浮于冰冻70% (v/v)乙醇中。细胞在 PBS和 1% (w/v) BSA中冲洗两次，再在 PBS 和含 50 g/mL 碘化丙啶和 50 g/mL RNase A的0.1% (v/v) Triton X-100中染色 20分钟。使用FACSCalibur流式细胞仪和CellQuest软件检测细胞中DNA含量。在线性标度上测量红色荧光(585 nm)，进行脉冲宽度分析用于排除双峰值。使用FlowJo软件测定细胞周期分布。 |
| 动物实验 |
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- 【注意】
- ●我司产品为非无菌包装，若用于细胞培养，请提前做预处理，除去热原细菌，否则会导致染菌。
●部分产品我司仅能提供部分信息，我司不保证所提供信息的权威性，以上数据仅供参考交流研究之用。
