PP242

Torkinib (PP242)是一种选择性的mTOR抑制剂，在无细胞试验中IC50为8 nM；靶向作用于mTOR复合体，作用于mTOR比作用于PI3Kδ或PI3Kα/β/γ选择性分别高10倍多和100倍。

特性

第一批以mTOR的ATP域为靶点的选择性抑制剂之一。

靶点

体外研究

PP242作用于mTOR比作用于其他PI3K家族激酶，比如p110α，p110β，p110γ，p110δ，和DNA-PK(IC50分别为1.96 μM，2.2 μM，1.27 μM，0.102 μM，和0.408 μM)，表现出更有效的选择性。PP242对Ret，PKCα，PKCβ，和JAK2表现出一定的抑制活性，而对215种其他蛋白激酶具有显著的选择性。不同于rapamycin，PP242同时抑制mTORC1和 mTORC2。在BT549细胞中，PP242治疗(0.04-10 μM)以剂量依赖的方式抑制Akt，mTOR底物p70S6K，和其下游靶点S6的磷酸化。PP242有效抑制PKCα，IC50 为49 nM。低浓度PP242抑制Akt S473磷酸化，较高浓度部分抑制除S473-P 外的Akt T308-P。PP242作为比rapamycin更有效的mTORC1抑制剂，能够抑制原代MEFs细胞的增殖，以及4EBP1在T36/45和S65上的磷酸化，比rapamycin更有效。通过比rapamycin引起更高水平的4EBP1 和eIF4E结合，PP242有效抑制cap依赖性翻译，而 rapamycin无此作用。PP242有效抑制p190转化的小鼠BM，SUP-B15，和K562细胞增殖，GI50分别为12 nM，90 nM，和85 nM。PP242也会抑制固体肿瘤细胞系，如SKOV3，PC3，786-O，和U87的生长，GI50 分别为0.49 μM，0.19 μM，2.13 μM，和1.57 μM。PP242能够比rapamycin更有效地使多发性骨髓瘤(MM)细胞减少和凋亡。

体内研究

在小鼠脂肪和肝脏中，PP242给药能够完全抑制Akt在S473和T308的磷酸化。PP242仅部分抑制骨骼肌中Akt磷酸化，并且对T308磷酸化的抑制比对S473更有效，尽管其能够完全抑制4EBP1和S6的磷酸化。PP242口服给药有效延缓白血病在小鼠模型中的发病，并通过抑制与细胞大小损失相关的mTORC2和mTORC1活化，诱导白血病消退。PP242治疗有效抑制小鼠体内8226细胞的生长。

AZD8055

MB1596

BEZ235 (Dactolisib)

MB1449

Everolimus;RAD001

MB3525

GDC-0084

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.2432 mL

16.2159 mL

32.4317 mL

5 mM

0.6486 mL

3.2432 mL

6.4863 mL

10 mM

0.3243 mL

1.6216 mL

3.2432 mL

50 mM

0.0649 mL

0.3243 mL

0.6486 mL

体外mTOR (FRAP1)激酶试验:
重组mTOR与50-0.001 μM浓度范围内连续2倍稀释的PP242在试验缓冲液中进行培养，缓冲液包含50 mM HEPES，pH 7.5，1 mM EGTA，10 mM MgCl2，0.01% Tween，10 μM ATP (2.5 μCi of γ-32P-ATP)，和3 μg/mL BSA。大鼠重组PHAS-1/4EBP1 (2 mg/mL)用作底物。通过在1 M NaCl/1%磷酸(大约6次，每次5-10分钟)洗涤过的硝酸纤维素上点样终止反应。将板片干燥，转移的放射性通过磷光成像定量。IC50值使用Prism软件包将数据拟合到S形剂量反应曲线进行计算。

细胞实验：

• Cell lines:MEFs
• Concentrations:在DMSO中溶解，终浓度为~10 μM
• Incubation Time:72小时
• Method:细胞用逐渐增加浓度的PP242在96孔板中处理72小时。处理72小时后，将10 μL 440 μM刃天青钠盐加入到每孔中，18小时后，每孔中的荧光强度使用顶端读取的荧光板阅读器在530 nm激发波长和590 nm发射波长下测量。

动物实验：

• Animal Models:负荷小鼠p190转染的会引发白血病的BM细胞的同源(Balbc/J)小鼠，和静脉注射SUP-B15ffLuc细胞或人Ph+白血病细胞的雌性小鼠
• Formulation:溶于PEG400 (聚乙二醇)
• Dosages:~60 mg/kg/day
• Administration:口服强饲