T细胞、B细胞、NK细胞、树突状细胞(DC)、巨噬细胞等免疫细胞的体外活化、扩增与功能极化,是免疫学基础研究、疫苗开发及细胞治疗的核心环节。然而,您在实验过程中是否遇到过以下困扰:

  • T细胞体外活化后增殖缓慢、分化方向不纯,Th1/Th2/Th17/Treg亚型诱导效率低下?
  • NK细胞扩增倍数不足、细胞毒性弱,难以满足功能实验需求?
  • DC细胞诱导分化不成熟、抗原呈递能力差,影响后续T细胞激活实验?

小美今天继续为大家带来美仑生物MGC™系列高活性细胞因子,专为各类免疫细胞的体外激活、扩增及亚型极化而优化,帮助您从源头掌控细胞质量,让每一次免疫实验都稳健可靠。

一、为什么免疫细胞活化与培养离不开优质细胞因子?

免疫细胞的命运——从静止到活化、从扩增到分化、从效应到记忆,每一步都受到细胞因子的精密调控。T细胞的激活依赖TCR信号与共刺激信号的协同,而IL-2则是维持其增殖的核心驱动力;NK细胞的扩增与细胞毒性功能离不开IL-2、IL-15、IL-12、IL-18等因子的协同作用;DC细胞的分化与成熟则需要GM-CSF、IL-4、TNF-α等因子的时序性诱导。

使用高活性、低内毒素、无载体蛋白的细胞因子,能显著提升免疫细胞培养的成功率和实验结果的批间可重复性。美仑MGC™系列细胞因子专为免疫细胞培养场景设计,助您从源头把控实验品质。

图 1. 免疫细胞类型

二、免疫细胞培养方案推荐

以下分别介绍T细胞、NK细胞和DC细胞的活化、扩增及分化常用细胞因子组合,供参考。

1.T细胞活化、扩增与分化核心方案

T细胞亚群核心诱导因子可选小分子/强化因子主要功能
T细胞活化(通用)抗CD3抗体(2μg/mL) + 抗CD28抗体(2μg/mL) + IL-2 (20ng/mL)——T细胞受体交联,诱导活化与增殖
Th1IL-12 (10~20ng/mL) + IL-2 (20ng/mL)IFN-γ (10ng/mL,可选)抵御细胞内病原体
Th2IL-4 (10~20ng/mL) + IL-2 (20ng/mL)STAT6激动剂(1μM,可选)防御过敏/哮喘
Th9TGF-β (2~5ng/mL) + IL-4 (10ng/mL) + IL-2 (20ng/mL)RAR抑制剂 LE135 (1μM)抗肿瘤
TregTGF-β (5~10ng/mL) + IL-2 (20~50ng/mL)视黄酸(10nM) + 西罗莫司(10nM)免疫调节
Th17TGF-β (2ng/mL) + IL-6 (20~50ng/mL)  IL-23 (10ng/mL,维持);IL-1β (10ng/mL,可选)抵御胞外细菌/参与自身免疫炎症
TFHIL-6 (20ng/mL) + IL-21 (20ng/mL)ICOS激动剂 + STAT3激动剂辅助B细胞
NKTIL-15 (100ng/mL) + IL-7 (10ng/mL)GM-CSF (20ng/mL,可选)、α-GalCer (100ng/mL) + Notch激动剂抗病毒/抗肿瘤

图2. Naïve T细胞分化为不同T细胞亚群相关的细胞因子

2.自然杀伤(NK)细胞激活、扩增与分化核心方案

分类发育阶段核心细胞因子小分子/添加剂说明
分化HSC→CLPSCF、Flt3L、IL-3、IL-7维生素C、L-谷氨酰胺造血干细胞向共同淋巴祖细胞分化
CLP→NKPSCF、Flt3L、IL-15Notch抑制剂(如DAPT,可选)向NK祖细胞定向
NKP→iNKIL-15——未成熟NK细胞扩增
iNK→mNKIL-15——成熟NK细胞维持
功能性调控细胞毒性组合1:IL-2或IL-15 + IL-12 + IL-18;组合2:IL-15 + IL-21RAR激动剂(可选)抗病毒、抗肿瘤
调节性TGF-β、IL-15(低剂量)——免疫调节、抑制炎症
耐受性TGF-β / IL-10——诱导NK细胞功能抑制
ADCC活化IL-2 + 抗CD16抗体 交联CD16受体,模拟ADCC

图3. 自然杀伤细胞分化与培养相关的细胞因子

3. 树突状细胞(DC)分化与成熟核心方案

途径阶段/细胞类型核心细胞因子小分子/补充剂说明
淋巴途径HSC → Lymphoid precursorSCF、Flt3L、IL-7维生素C、L-谷氨酰胺造血干细胞向淋巴祖细胞分化
Lymphoid precursor → pDC前体Flt3L、IL-3(可选)——淋巴祖细胞向浆细胞样DC前体分化
pDC前体 → 未成熟pDCFlt3L——维持pDC前体扩增
未成熟pDC → 成熟pDC——CpG ODN、R848(TLR7/8激动剂)激活pDC,分泌大量I型干扰素(IFN-α/β),抗原呈递
髓系途径
(经典DC)
HSC → Myeloid precursorSCF、Flt3L、GM-CSF(可选)——造血干细胞向髓系祖细胞分化
Myeloid precursor → CDP → pre-cDCFlt3L、GM-CSF——常见DC前体(共同DC祖细胞)
pre-cDC → cDC1/cDC2Flt3L、GM-CSFNotch抑制剂(可选,促进cDC1)cDC1(CD141+):交叉呈递;cDC2(CD1c+):CD4+ T活化
髓系途径
(单核来源DC)
Myeloid precursor → 单核细胞M-CSF——产生外周血CD14+单核细胞
单核细胞 → 未成熟DC(iDC)GM-CSF、IL-4、IL-13(可选)——高吞噬能力,低表达MHC-II和共刺激分子
iDC → 成熟DC(mDC)TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γLPS、Poly(I:C)、PGE2、CD40L高表达MHC-II、CD80/CD86/CD83,强抗原呈递能力

图4. 树突状细胞分化与发育相关的细胞因子

三、T细胞体外分化状态调控的应用详解(文献PMID: 23207483)

过继性细胞治疗(ACT)是肿瘤免疫治疗的重要手段,而回输T细胞的分化状态直接影响其体内持久性和抗肿瘤效果——高度分化的效应T细胞虽体外功能强,但体内持久性差;而分化程度较低的T细胞则具有更强的体内扩增能力和抗肿瘤活性。Yang et al. (2012) 在 Cancer Immunology, Immunotherapy上发表的研究,系统比较了不同细胞因子组合对TCR基因工程人CD8+T细胞体外分化状态的影响,发现时序性组合使用IL-12、IL-7和IL-21可诱导具有CD62LhighCD28highCD127highCD27highCCR7high表型的低分化T细胞,并显著增强其在体内的持久性。

1.分化流程概述

该研究采用时序性细胞因子添加策略:所有培养组均在抗CD3抗体(OKT3)刺激下以IL-2(300 IU/mL)启动活化与扩增;第4天起加入不同细胞因子组合(IL-12+IL-7或IL-12+IL-21等);第7天撤除IL-12,继续培养至第10~12天。通过这一“启动-极化-撤除”的时序方案,可获得低分化表型的CD8+T细胞。

图5. T细胞体外分化状态调控流程图

2.各阶段培养基与细胞因子/小分子组合

阶段持续时间基础培养基核心细胞因子/抗体作用简述
活化与转导阶段第0~4天AIM-V + 5%人AB血清包被抗CD3抗体(1μg/mL)+ IL-2(300IU/mL)TCR交联激活,驱动初始扩增;同时进行慢病毒转导
极化阶段第4~7天IL-12(10ng/mL)+ IL-7(10ng/mL) 或 IL-12(10ng/mL)+ IL-21(10ng/m)诱导低分化表型,上调CD62L、CD28、CD127、CD27、CCR7,诱导干细胞相关基因表达
扩增与维持阶段第7~12天IL-7(10ng/mL)或 IL-21(10ng/mL)单独维持(撤除IL-12)维持低分化表型,支持细胞继续扩增

【注】

·撤除IL-12是关键步骤:持续IL-12存在会抑制CD127表达,撤除后方可获得CD127high表型;IL-21组在撤除IL-12后,CD8+T细胞的IFN-γ和IL-2分泌虽有下降,但低分化表型更显著(CD62LhighCD28high CD127highCD27highCCR7high)。

·干细胞相关基因(SOX2、NANOG、OCT4、LIN28A)的上调,提示该方案使T细胞获得了更接近“干性”的状态。

四、MGC™细胞因子验证数据(部分举例)

1.高生物活性ED50 

Recombinant Human FLT-3L(Cat. No. MGC024) stimulates proliferation of OCI-AML5 cells.

The ED50 for this effect is ≤1.0 ng/mL. The activity of recombinant Human FLT-3L(Cat. No. MGC024) was higher than the other competing product.

2.生物活性—T细胞扩增与表型维持

图6. 人外周血T细胞体外培养后表面标志物的比较.

流式检测显示,CD3+T细胞纯度> 90%,其中CD3+CD4+比例与Day0接近,CD3+CD8+比例> 50%,细胞活力> 85%,美仑细胞因子及培养基(PWL098)可高效扩增原代人T细胞,维持良好亚群比例

所用细胞因子:IL-2 (MGC038, 50ng/mL)

所用抗体:抗CD3抗体(MGC011, 2μg/mL)、抗CD28抗体(MGC013, 2μg/mL)

相关产品信息

  • 细胞因子和重组蛋白
产品编码产品名称表达系统
及标签
种属内毒素
(EU/μg)
包装规格
MGC003Recombinant Human Heat Stable bFGFE.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC006Recombinant Human BMP-4E.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC024Recombinant Human FLT-3LCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC025Recombinant Human GM-CSFCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC026Recombinant Mouse GM-CSFCHOMouse≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC028Recombinant Human G-CSFHEK293Human≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC029Recombinant Mouse G-CSFCHOMouse≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC034Recombinant Human IFNγCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC037Recombinant Human IL-1BE.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC038Recombinant Human IL-2CHOHuman≤0.00110μg/50μg/1mg
MGC039Recombinant Human IL-3E.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC040Recombinant Human IL-4CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC041Recombinant Human IL-5CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC042Recombinant Human IL-6CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC043Recombinant Bovine IL-6E.coliBovine≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC044Recombinant Human IL-7CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC045Recombinant Human IL-10CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC047Recombinant Human IL-12CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC048Recombinant Human IL-13CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC049Recombinant Human IL-15CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC051Recombinant Human IL-18E.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC052Recombinant Human IL-21CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC054Recombinant Human IL-23CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC055Recombinant Mouse IL-27(His Tag)HEK293,C-6HisMouse≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC065Recombinant Human M-CSFE.coliHuman≤0.110μg/50μg/1mg
MGC066Recombinant Mouse M-CSFCHOMouse≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC080Recombinant Human SCFCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC081Recombinant Human TGF-β1CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC083Recombinant Human TGF-β3CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC084Recombinant Human TNFαCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC086Recombinant Human TPOCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC088Recombinant Human VEGF165CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC091Recombinant Human 4-1BBLHEK293Human≤0.0510μg/50μg/1mg
MGC011Recombinant Anti-Human CD3 mAbCHOMouse≤0.00150μg/1mg
MGC012Recombinant Anti-Human CD16 mAbCHOMouse≤0.0011mg
MGC013Recombinant Anti-Human CD28 mAbCHOMouse≤0.00150μg/1mg
  • 小分子
产品编码产品名称CAS包装规格
MC9833Y-27632146986-50-71mg/5mg/10mg/50mg/100mg
MC9828SB-431542301836-41-95mg/10mg/50mg
MB5152DAPT(GSI-IX)208255-80-510mg
MB1302维A酸;全反式维A酸;维生素A酸;视黄酸302-79-41g/5g
  • 其他
产品编码产品名称包装规格
PWL002特级胎牛血清(原代细胞干细胞专用)25mL/100mL/500mL
PWL098T细胞无血清培养基(无异源)100mL/1000mL
PWL038Advanced DMEM/F-12500mL
PWL088Non-essential Amino Acid (NEAA, 100×)100mL
PWL031L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液(200mM)100mL
PWL048Meiluncell®高回收率干细胞专用清洗液200mL
PWL085重组胰蛋白酶消化液(含EDTA,不含酚红),干细胞专用100mL
PWL234无蛋白非程序细胞冻存液(干细胞专用)20mL/100mL
PWL062双抗灭菌液,青霉素/链霉素溶液,灭菌100mL
MA0345抗生素-抗真菌(100×);三抗100mL
PWL207CellTiter-Meiluncell 3D发光法细胞活力检测试剂盒10mL(>100T)/100mL(>1000T)/500mL(>5000T)
MA0440增强型ATP检测试剂盒200T
MA0220AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒10T/50T/100T/50T×5/100T×5
MA0223一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光)20T/50T
MA0343细胞培养污染检测试剂盒20T
MA0329Caspase3/7活性检测试剂盒20T/100T
MA0219活性氧检测试剂盒(ROS)100T/1000T
MA0726人白细胞介素2酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒
MA0727人白细胞介素4酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒
MA0728人白细胞介素6酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒
MA0772人白细胞介素7酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒
MA0831人白细胞介素15酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒
MA1050人白细胞介素21酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒
MA0737人α肿瘤坏死因子酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒
MA0887人肿瘤坏死因子β酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒
MA0723人γ-干扰素酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒
MA1099人巨噬细胞集落刺激因子酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒
MA0722人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒
MA0780小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒

成体干细胞(如神经干细胞、间充质干细胞、造血干细胞)的定向分化,为再生医学、疾病建模和药物筛选带来了无限可能。然而,您在实验过程中是否遇到过以下困扰:

  • 神经干细胞扩增几代后分化效率骤降,神经元成熟度不足?
  • 间充质干细胞成骨、成脂、成软骨分化比例不稳定,批间差异大?
  • 造血干细胞自我更新难以维持,定向分化为特定血细胞谱系得率低?

小美今天继续为大家带来美仑生物MGC™系列高活性细胞因子,专为神经干细胞(NSC)、间充质干细胞(MSC)和造血干细胞(HSC)的维持扩增及定向分化而优化,帮助您精准驾驭干细胞的命运,让每一批分化实验都稳健可靠。

一、为什么干细胞定向分化离不开优质细胞因子?

干细胞的自我更新与多谱系分化受到微环境中多种信号通路的精密调控。无论是维持NSC的神经球形态,还是引导MSC向骨、软骨、脂肪分化,抑或是驱动HSC向特定血细胞谱系特化,都离不开高纯度、高活性的细胞因子。

使用低内毒素、无载体蛋白、批间一致性高的细胞因子,能显著降低实验背景干扰,提高分化方案的重复性和成功率。美仑MGC™系列细胞因子专为干细胞定向分化场景设计,助您从源头把控细胞命运。

图1. 干细胞分化图谱

二、干细胞定向分化培养方案推荐

以下分别介绍神经干细胞(NSC)、间充质干细胞(MSC)和造血干细胞(HSC)的维持、扩增及定向分化常用细胞因子组合,供参考。

  1. 神经干细胞(NSC)分化方案
分化类型细胞因子其他分子
NSC维持/扩增EGF、FGF-2、PDGF-BB、VEGF、β-NGFHeparin、B-27
神经元祖细胞EGF、FGF-2、FGF-10、SHH——
神经元(泛神经元)FGF-2、PDGF-BBForskolin、DAPT
脊髓运动神经元BDNF、CNTF、GDNF、IGF-1Retinoic acid、Purmorphamine
多巴胺能神经元BDNF、FGF-4、FGF-8、SHHCHIR99021、Purmorphamine
谷氨酸能神经元BMP-2、BMP-4、FGF-8——
GABA能神经元BDNF、GDNF、IGF-1、NT-4、SHHDAPT
海马神经元BDNF、IGF-1——
神经胶质祖细胞CNTF、FGF-2、PDGF-BB——
星形胶质细胞CNTF、EGF, LIF——
少突胶质细胞EGF、FGF-2、CNTF、IGF-1、PDGF-BBT3、T4
胆碱能神经元NGF、LIF、CNTF——
血清素能神经元FGF-4、SHH、FGF-8CHIR99021
视网膜神经元FGF-2、IGF-1、SHHRA、DAPT

图2. 参与神经干细胞分化的细胞因子示意图

  • 间充质干细胞(MSC)分化方案
分化类型细胞因子其他分子
MSC维持/扩增FGF-2、EGF、PDGF-BB、TGF-β——
血管生成(内皮细胞)VEGFY-27632(可选,促存活)
骨生成(成骨细胞)BMP-2、BMP-4、FGF-2、IGF-1、TGF-βDexamethasone、β-甘油磷酸钠、维生素C
软骨生成(软骨细胞)BMP-2、BMP-4、BMP-5、FGF-2、IGF-1、TGF-β1、TGF-β3、WntsDexamethasone、维生素C、ITS(胰岛素-转铁蛋白-硒)
脂肪生成(脂肪细胞)BMP-2、BMP-4Insulin、IBMX、Dexamethasone、Rosiglitazone(或Indomethacin)
肌肉生成(肌细胞)BMP-4、FGF-2、PDGF-BB5-Azacytidine(Day 0~1, 仅24h)、Dexamethasone

图3. 参与间充质干细胞分化的细胞因子示意图

3. 造血干细胞(HSC)分化方案

分化类型细胞因子其他分子
HSC自我更新/维持Flt3L、SCF、TPO、CXCL12UM171、StemRegenin1
B细胞ICAM-1、VCAM-1、Flt3L、SCF、IL-7——
巨核细胞TPO、IL-3——
红细胞生成SCF、EPO、IL-3Dexamethasone
T细胞IL-7、SCF、VCAM-1——
单核细胞IL-6、M-CSF、GM-CSF——
嗜中性粒细胞GM-CSF、G-CSF——

图4. 参与造血干细胞分化的细胞因子示意图

  • MSC扩增与软骨分化的应用详解(文献PMID: 25754206)

软骨损伤修复是再生医学的难点。MSC虽具有软骨分化潜能,但体外扩增易导致软骨潜能丧失,且分化后易发生肥大成熟(软骨内骨化),严重阻碍临床转化。Narcisi et al. (2015) 在 Stem Cell Reports 上发表的研究,从胚胎肢体发育中汲取灵感,发现Wnt3a与FGF-2协同作用可支持人骨髓MSC长期扩增并维持强大的软骨潜能;同时,在分化阶段抑制内源性WNT信号可有效阻止肥大成熟,形成稳定的软骨组织。

  1. 分化流程概述

该研究采用两阶段策略:扩增阶段使用Wnt3a+FGF-2处理人骨髓MSC(连续传代4次以上);软骨分化阶段在微球培养体系中加入TGF-β1诱导软骨形成,并选择性添加WNT抑制剂IWP-2以抑制肥大成熟。全程时长约5~9周。

图5. Wnt3a+FGF-2扩增及软骨分化流程图

  • 各阶段培养基与细胞因子/小分子组合
阶段持续时间培养基基础核心细胞因子/小分子
扩增阶段(维持干性与软骨潜能)连续传代,每5天传代1次,共4代α-MEM + 10% FBSWnt3a(250ng/mL) + FGF-2(1ng/mL) + 25μg/mL 维生素C
软骨分化诱导5周DMEM高糖 + ITSTGF-β1(10ng/mL)+ 40μg/mL脯氨酸 + 100nM地塞米松
抑制肥大成熟(可选)分化后2~5周(最后3周添加)DMEM高糖 + ITS TGF-β1(10ng/mL)+ IWP-2(2μM)+40μg/mL脯氨酸 + 100nM地塞米松

【注】

·扩增阶段Wnt3a+FGF-2联合处理可使细胞扩增109倍(6代),而单独FGF-2处理在30天后增殖停滞。

·分化评价:Thionine染色(GAG)、胶原II免疫组化(软骨基质);胶原X、ALP、MMP13(肥大标志)。

四、MGC™细胞因子验证数据(部分举例)

  1. 高生物活性ED50 

Recombinant Human SCF (Cat. No. MGC080) stimulates proliferation of TF-1 cells. The ED50 for this effect is 5-8ng/mL. The activity of MGC080 was higher than other competing products.

  • 生物活性—MSC高分化潜能

图7. 人间充质干细胞分别诱导成骨/成脂/成软骨后的染色效果

所用到的细胞因子:bFGF(MGC003)、EGF(MGC015)、PDGF-BB(MGC075)、TGF-β1(MGC081)、TGF-β3(MGC083)。

相关产品信息

  • 细胞因子和重组蛋白
产品编码产品名称表达系统种属内毒素包装规格
及标签(EU/μg)
MGC003Recombinant Human Heat Stable bFGFE.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC004Recombinant Human BDNFCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC005Recombinant Human BMP-2E.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC006Recombinant Human BMP-4E.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC009Recombinant Human CNTFE.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC015Recombinant Human EGFCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC016Recombinant Human EPOCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC017Recombinant Human FGF-4E.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC019Recombinant Human FGF-8bE.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC024Recombinant Human FLT-3LCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC025Recombinant Human GM-CSFCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC026Recombinant Mouse GM-CSFCHOMouse≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC028Recombinant Human G-CSFHEK293Human≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC029Recombinant Mouse G-CSFCHOMouse≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC031Recombinant Human GDNFE.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC032Recombinant Human β-NGFHEK293Human≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC034Recombinant Human IFNγCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC038Recombinant Human IL-2CHOHuman≤0.00110μg/50μg/1mg
MGC039Recombinant Human IL-3E.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC040Recombinant Human IL-4CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC042Recombinant Human IL-6CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC043Recombinant Bovine IL-6E.coliBovine≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC044Recombinant Human IL-7CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC045Recombinant Human IL-10CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC046Recombinant Human IL-11CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC047Recombinant Human IL-12CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC049Recombinant Human IL-15CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC052Recombinant Human IL-21CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC058Recombinant Human IGF-1HEK293Human≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC061Recombinant Human LIFCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC062Recombinant Mouse LIFCHOMouse≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC065Recombinant Human M-CSFE.coliHuman≤0.110μg/50μg/1mg
MGC066Recombinant Mouse M-CSFCHOMouse≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC067Recombinant Human NogginCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC068Recombinant Mouse NogginCHOMouse≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC071Recombinant Human OSMCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC075Recombinant Human PDGF-BBCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC080Recombinant Human SCFCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC081Recombinant Human TGF-β1CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
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MGC083Recombinant Human TGF-β3CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC086Recombinant Human TPOCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
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MGC090Recombinant Human Wnt-3a (hFc Tag)CHO,C-FcHuman≤0.110μg/50μg/1mg
  • 小分子
产品编码产品名称CAS包装规格
MB4054IWP-2686770-61-610mg/50mg
MC9833Y-27632146986-50-71mg/5mg/10mg/50mg/100mg
MC9828SB-431542301836-41-95mg/10mg/50mg
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MB1661烟酰胺/尼克酰胺/维生素B398-92-025g/100g
MB1735N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)616-91-125g/100g
  • 其他
产品编码产品名称包装规格
PWL002特级胎牛血清(原代细胞干细胞专用)25mL/100mL/500mL
PWL038Advanced DMEM/F-12500mL
PWL043Neural-27添加剂 (50X) 去除维生素A10mL/100mL
PWL079N-2添加剂 (100X)5mL/50mL
PWL083ITS液体培养基补充剂(100×)10mL
PWL088Non-essential Amino Acid (NEAA, 100×)100mL
PWL031L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液(200mM)100mL
PWL048Meiluncell®高回收率干细胞专用清洗液200mL
PWL085重组胰蛋白酶消化液(含EDTA,不含酚红),干细胞专用100mL
PWL234无蛋白非程序细胞冻存液(干细胞专用)20mL/100mL
MB3848Insulin(human)100mg
MB3235人转铁蛋白10mg/100mg
MB4168抗坏血酸;维生素C25g/100g
MA0659Versene溶液100mL
PWL062双抗灭菌液,青霉素/链霉素溶液,灭菌100mL
MA0345抗生素-抗真菌(100×);三抗100mL
MB2711胶原酶IV型100mg/1g
PWL207CellTiter-Meiluncell 3D发光法细胞活力检测试剂盒10mL(>100T)/100mL(>1000T)/500mL(>5000T)
MA0440增强型ATP检测试剂盒200T
MA0220AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒10T/50T/100T/50T×5/100T×5
MA0223一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光)20T/50T
MA0343细胞培养污染检测试剂盒20T
MA0329Caspase3/7活性检测试剂盒20T/100T
MA0219活性氧检测试剂盒(ROS)100T/1000T
MA0739人胰岛素酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒
MA0900人甲胎蛋白酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒
MA1084人血清白蛋白酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒
MA0894人脂联素酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒
PWL080人间充质干细胞成骨诱导分化与染色试剂盒200mL/KIT
PWL081人间充质干细胞成脂诱导分化与染色试剂盒200mL/KIT
PWL082人间充质干细胞成软骨诱导分化与染色试剂盒200mL/KIT

诱导多能干细胞(iPSC)和胚胎干细胞(ESC)具有无限增殖和分化为三胚层任一细胞类型的巨大潜力,为疾病模拟、药物筛选和再生医学带来了革命性机遇。然而,iPSC/ESC的长期未分化维持以及高效定向分化,高度依赖包被基质与细胞因子的协同调控。您在实验过程中是否有以下困扰:

  • iPSC/ESC增殖缓慢、自发分化或定向分化效率低下?
  • 如何让诱导多能干细胞稳定维持未分化状态?
  • 如何精准引导其奔向特定的细胞命运?

小美今天为大家带来美仑生物全新推出的MGC™系列高活性细胞因子,专为iPSC/ESC的包被、扩增、多能性维持及定向分化而优化,帮助您从源头把控细胞质量,让每一次实验都稳健可靠。

一、为什么iPSC/ESC培养与分化离不开优质细胞因子?

iPSC/ESC的干性维持依赖两条核心信号通路:激活FGF/MEK/ERK和抑制TGF-β/SMAD。外源添加高纯度的FGF-2和TGF-β1,配合专用的包被基质(如基质胶或层粘连蛋白),可有效抑制自发分化,维持克隆形态均一、边界清晰。而在定向分化中,Activin A、BMP-4、Wnt3a等因子则像“导航仪”一样,引导iPSC/ESC向心肌细胞、神经细胞、造血祖细胞等多谱系精准转化。

使用高活性、低内毒素、无载体蛋白的细胞因子,能显著提升iPSC/ESC培养的成功率和分化方案的批间可重复性。

图1. 诱导多能干细胞的分化(PMID: 28592657)

二、iPSC/ESC培养常用包被基质与选择

稳定的iPSC/ESC扩增离不开合适的包被基质。包被基质为细胞提供黏附支撑,直接影响克隆形态、未分化状态的维持以及传代效率。美仑生物提供多种包被产品,满足不同培养体系的需求。

包被基质适用场景推荐浓度/稀释比
基质胶无饲养层条件下维持iPSC/ESC未分化状态1:30~1:100稀释
玻连蛋白(Vitronectin)无动物源培养体系,适合iPSC/ESC短期扩增5~20µg/mL
层粘连蛋白Laminin511 E8无动物源培养体系,支持iPSC/ESC长期扩增,适配Essential 8(E8)包被使用5~10µg/mL(或0.5μg/cm2
层粘连蛋白Laminin521 E8直接添加使用
明胶(Gelatin)饲养层细胞包被或短期培养0.1%溶液

操作小贴士:

  • Laminin或Vitronectin用D-PBS稀释,4℃包被过夜或37℃ 2小时,临用前吸去包被液。
  • 配合Y-27632 (10μM) 传代可显著提高克隆存活率。
  • 首次使用某批次基质胶时,建议进行梯度稀释预实验,确定最佳包被浓度。

三、iPSC/ESC制备、扩增与分化核心工具推荐

从重编程获得iPSC,到维持其未分化增殖,再到验证多能性及精准定向分化——每一步都离不开合适的细胞因子与小分子。以下分别介绍重编程与增殖、多能性验证以及各类定向分化方案,供您参考。

  • 重编程、未分化增殖与多能性验证
应用方向核心细胞因子/小分子作用简述
重编程(成纤维→iPSC)转录因子:OCT4、SOX2、KLF4、c-MYC辅助细胞因子:FGF-2、EGF诱导成纤维细胞重编程为iPSC
未分化增殖(人)FGF-2、TGF-β1或 Activin A激活FGF及Nodal信号,抑制分化
未分化增殖(小鼠)LIF激活STAT3通路,维持小鼠ESC自我更新
三胚层分化(拟胚体法)内胚层:Activin A、Wnt3a
中胚层:BMP-4、FGF-2
外胚层:Noggin、SB431542
验证多能性,可生成三胚层来源细胞
  • iPSC/ESC定向分化核心因子组合
iPSC/ESC衍生细胞类型核心分化诱导因子(必需)功能成熟/修饰因子(辅助)
单核细胞和巨噬细胞细胞因子:GM-CSF、IL-3、M-CSFM1 极化:IFN-γ
M2 极化:IL-4、IL-13
调节性 T 细胞(Tregs细胞因子:TGF-β1、IL-2
小分子:视黄酸(RA)
IL-10、IL-33(维持表型与抑制功能)
肾祖细胞细胞因子:Activin A、BMP-4、FGF-2、FGF-9、Wnt3a——
间充质干细胞(MSCs细胞因子:FGF-2、PDGF-BB、TGF-β1
小分子:CHIR99021(短期Wnt激活)
可添加 TNF-α(用于免疫调节功能预处理)
肺上皮细胞谱系细胞因子:FGF-10、BMP-4、Wnt3a、FGF-7SB431542(TGF-β抑制剂)
内皮细胞细胞因子:VEGF165或VEGF121、FGF-2、BMP-4
小分子:CHIR99021(早期)
Ang-1(管腔成熟);避免TNF-α
肝细胞细胞因子:Activin A、FGF-4、HGF、OSM、EGF——
巨核细胞细胞因子:TPO、SCF、IL-6、IL-11、IL-3——
心肌细胞细胞因子:Activin A、BMP-4
小分子:CHIR99021、IWP2 或 IWR1
FGF-2、VEGF(促进存活与成熟)
神经元(泛神经元)小分子:SB431542 + LDN193189(双 SMAD 抑制)BDNF、GDNF(成熟)
多巴胺能神经元细胞因子:SHH、FGF-8
小分子:SB431542、LDN193189、CHIR99021
细胞因子:BDNF、GDNF、
小分子:cAMP激动剂、RA(低浓度)
视网膜色素上皮(RPE细胞因子:Noggin、DKK-1、IGF-1、FGF-2、Activin A自发成熟,可添加SU5402(FGF抑制剂)促进终末分化
胰岛 β 细胞细胞因子:Activin A、Wnt3a、FGF-10
小分子:RA、KAADcyclopamine、SB431542
Exendin4(GLP1激动剂)、T3(甲状腺激素)
骨骼肌细胞细胞因子:FGF-2
小分子:CHIR99021、SB431542
IGF-1、HGF(促进肌管成熟)

图2. iPSC/ESC定向分化关键因子信息图

四、iPSC定向分化为静脉内皮细胞的应用详解(文献PMID: 39579761)

静脉畸形(VMs)与TIE2等基因突变密切相关。利用iPSC分化为静脉内皮细胞(iVECs)并结合基因编辑,可为血管畸形建模和药物筛选提供理想平台。该研究通过调控视黄酸信号通路和细胞周期动力学,建立了高效生成iVECs的方案。简述分阶段诱导方案如下。

  1. 分化流程概述

该研究采用三阶段定向分化方案,依次将iPSC诱导分化为侧板中胚层(LPM)→ 静脉内皮祖细胞 → 成熟静脉内皮细胞(iVECs)。

图3. iPSC-静脉内皮细胞分化流程图

  • 各阶段培养基与细胞因子组合
阶段持续时间及作用培养基基础核心细胞因子/小分子
侧板中胚层(LPM)诱导第0~3天Wnt通路激活,中胚层特化LaSRCHIR99021(8μM)、Y-27632(5μM,仅首日)
静脉内皮特化第4~6天抑制Notch通路,激活视黄酸信号,促进静脉谱系特化LaSRVEGFA-165(10ng/mL)、FGF-2(30ng/mL)、DAPT(10μM)、视黄酸(2μM)
静脉内皮细胞扩增与维持第7+天维持静脉内皮表型,支持长期扩增DMEM/F12 + 15% FBSVEGFA-165(10ng/mL)、FGF-2(30ng/mL)、DAPT(10μM)、视黄酸(2μM)

【注】

  • LaSR = Advanced DMEM/F12 + GlutaMAX + 维生素C
  • 动脉内皮细胞(iAECs)分化需使用高浓度VEGFA(50ng/mL)、高浓度FGF-2(50ng/mL),并添加SB431542、Resveratrol、L690330,不加DAPT和视黄酸。

五、MGC™细胞因子验证数据(部分举例)

  1. 高生物活性ED50 

Determined by its ability to inhibit the proliferation of mouse MPC-11 cells. The expected ED50 is ≤ 2.0ng/ml, corresponding to a specific activity of ≥ 5×105 units/mg.

  • 生物活性IPSC传代稳定

在连续传代过程中,iPSC始终保持良好的生长状态:核仁清晰,细胞间连接紧密;所形成的克隆团形态饱满、均一,边界清晰;未观察到自发分化细胞.

所用细胞因子:Activin A、FGF-2、TGF-β1

美仑细胞因子家族 · 始终如一的品质承诺

相关产品信息

  • 细胞因子和重组蛋白
产品编码产品名称表达系统种属内毒素包装规格
及标签(EU/μg)
MGC001Recombinant Human Activin ACHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC003Recombinant Human Heat Stable bFGFE.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC004Recombinant Human BDNFCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC005Recombinant Human BMP-2E.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC006Recombinant Human BMP-4E.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC015Recombinant Human EGFCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC017Recombinant Human FGF-4E.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC018Recombinant Human FGF-7/KGFCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC019Recombinant Human FGF-8bE.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC020Recombinant Human FGF-9CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC021Recombinant Human FGF-10/KGF2CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC025Recombinant Human GM-CSFCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC026Recombinant Mouse GM-CSFCHOMouse≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC031Recombinant Human GDNFE.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC033Recombinant Human HGFCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC034Recombinant Human IFNγCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC037Recombinant Human IL-1BE.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC038Recombinant Human IL-2CHOHuman≤0.00110μg/50μg/1mg
MGC039Recombinant Human IL-3E.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC042Recombinant Human IL-6CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC043Recombinant Bovine IL-6E.coliBovine≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC045Recombinant Human IL-10CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC046Recombinant Human IL-11CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC056Recombinant Human IL-33E.coliHuman≤0.0210μg/50μg
MGC060Recombinant Human LR3 IGF1CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC065Recombinant Human M-CSFE.coliHuman≤0.110μg/50μg/1mg
MGC066Recombinant Mouse M-CSFCHOMouse≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC067Recombinant Human NogginCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC068Recombinant Mouse NogginCHOMouse≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC071Recombinant Human OSMCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC075Recombinant Human PDGF-BBCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC080Recombinant Human SCFCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC081Recombinant Human TGF-β1CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC084Recombinant Human TNFαCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC086Recombinant Human TPOCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC087Recombinant Human VEGF121CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC088Recombinant Human VEGF165CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC090Recombinant Human Wnt-3a (hFc Tag)CHO,C-FcHuman≤0.110μg/50μg/1mg
MGC063Recombinant Human Laminin511 E8HEK293,N-6HisHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC064Recombinant Human Laminin521 E8HEK293Human≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC089Recombinant Human VitronectinCHOHuman≤0.00110μg/50μg/1mg
  • 小分子
产品编码产品名称CAS包装规格
MC9833Y-27632146986-50-71mg/5mg/10mg/50mg/100mg
MC2046SB 202190152121-30-75mg/10mg/25mg/100mg
MC9830A 83-01909910-43-61mg/5mg/10mg/50mg/100mg
MC9028MK-2206 dihydrochloride1032350-13-25mg/10mg/50mg/100mg
MC9834Dorsomorphin dih ydrochloride1219168-18-95mg/10mg/20mg/50mg/100mg
MC9828SB-431542301836-41-95mg/10mg/50mg
MC9582RepSox446859-33-210mg/50mg
MC9606LDN1931891062368-24-410mg/50mg
MB1661烟酰胺/尼克酰胺/维生素B398-92-025g/100g
MB5152DAPT (GSI-IX)208255-80-510mg
MB5959Forskolin(毛喉素;佛司可林)66575-29-910mg
MB1138Dinoprostone363-24-61mg/10mg
MB5682CHIR-99021252917-06-95mg
MB1302维A酸;全反式维A酸;维生素A酸302-79-41g/5g
MB1735N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)616-91-125g/100g
MB3700Purmorphamin483367-10-85mg
MB4050IWR-1-endo1127442-82-310mg
MB6045LY294002154447-36-610mg/50mg
MB4054IWP-2686770-61-610mg/50mg
MB0262IWP-4686772-17-85mg/25mg
  • 其他
产品编码产品名称包装规格
PWL307Meiluncellgel 基质胶 (干细胞用, 无酚红)5mL/10mL
MB2496明胶500g
PWL002特级胎牛血清(原代细胞干细胞专用)25mL/100mL/500mL
PWL038Advanced DMEM/F-12500mL/500mL×20
PWL096DMEM/F-12培养基500mL/500mL×10
PWL003DMEM高糖培养基500mL/500mL×20/ 1000mL/500mL×10
PWL043Neural-27添加剂 (50X), 去除维生素 A; 等同于B-2710mL/100mL
PWL079N-2添加剂 (100X)5mL/50mL
PWL083ITS液体培养基补充剂(100×)10mL
PWL042Optimal-MEM减血清培养基不含酚红,用于细胞转染100mL/500mL
PWL088Non-essential Amino Acid(NEAA,100×)100mL
PWL031L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液(200mM)100mL
MA0155L-谷氨酰胺溶液((100X),200mM100mL
MA00361M HEPES溶液(细胞培养级)100mL
MB3848Insulin(human)100mg
MB3235人转铁蛋白10mg/100mg
MB4168抗坏血酸;维生素C25g/100g
PWL048Meiluncell®高回收率干细胞专用清洗液200mL
MA0659Versene溶液100mL
PWL085重组胰蛋白酶消化液(含EDTA,不含酚红),干细胞专用100mL
PWL234无蛋白非程序细胞冻存液(干细胞专用)20mL/100mL
PWL062双抗灭菌液,青霉素/链霉素溶液,灭菌100mL
MA0345抗生素-抗真菌(100×);三抗100mL
MB2711胶原酶IV型100mg/1g
PWL207CellTiter-Meiluncell 3D发光法细胞活力检测试剂盒10mL(>100T)/100mL(>1000T)/500mL(>5000T)
MA0440增强型ATP检测试剂盒200T
MA0220AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒10T/50T/100T/50T×5/100T×5
MA0223一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光)20T/50T
MA0343细胞培养污染检测试剂盒20T
MA0329Caspase3/7活性检测试剂盒20T/100T
MA0219活性氧检测试剂盒(ROS)100T/1000T
MA0739人胰岛素酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒
MA0900人甲胎蛋白酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒
MA1084人血清白蛋白酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒
MA0894人脂联素酶联免疫吸附测定试剂盒96次/盒

类器官作为体外重现组织结构与功能的重要3D模型,其形成、扩增与成熟高度依赖培养体系中细胞因子的精准配比。您在实验过程中是否有以下困扰:

▶ 肠道类器官如何维持干性?

▶ 脑类器官怎样定向分化?

▶ 肝类器官的成熟又依赖哪些信号?

小美今天为大家带来美仑生物全新推出的MGC™系列高活性细胞因子,涵盖肠道、脑、肝、心脏、血管、肿瘤等十余种类器官培养方案,并附上经典因子组合与关键小分子,助您稳定构建理想模型。

一、为什么类器官培养离不开优质细胞因子?

类器官的自我组装、谱系分化和长期维持,本质上是干细胞/祖细胞对微环境信号的响应。其中,Wnt、EGF、FGF、BMP、Noggin、RSPO等家族成员扮演着“指挥家”角色——它们或激活增殖,或抑制分化,或维持干性。使用高活性、低内毒素、无载体蛋白的细胞因子,能显著提升类器官的成功率和重复性。

图1. 类器官构建示意图(PMID: 30534474)

二、主流类器官培养细胞因子组合推荐

以下方案汇总了不同类器官类型所需的核心细胞因子及辅助小分子(部分常用小分子美仑生物亦有提供),供您参考。

  1. 正常组织类器官培养方案推荐:
类器官类型相关细胞因子相关小分子
肠道Activin A、BMP-4、EGF、FGF-2、FGF-4、IL-22、LR3 IGF1、NogginRSPO1Wnt3aA83-01、Y-27632、CHIR-99021、SB-202190
Activin A、BMP-4、EGF、FGF-4、FGF10NogginRSPO1Wnt3aA83-01、Y-27632、CHIR-99021、SB-202190、PMA、PD0325901
BDNF、BMP-4、CNTF、CXCL12、DKK-1、EGFFGF2、FGF-4、FGF-8、FGF-19、GDNF、Insulin、Noggin、SHH、TGF-β1Y-27632、CHIR-99021
心脏Activin ABMP-4FGF2、FGF-4、FGF-10、LIFY-27632、CHIR-99021、LY-294002
Activin A、BMP-2、BMP-4、DKK-1、EGF、FGF-2、FGF-4、FGF-7、FGF-10、 FGF-19、 HGF、Insulin、OSM、RSPO1、TGF-β1、Wnt-3aA83-01、Y-27632、CHIR-99021
BMP-2、BMP-4、BMP-5、BMP-7、HGF、EGF、FGF-2、FGF-7、FGF-10、FGFR2、HGFAC、IGF-1、Noggin、RSPO1A83-01、Y-27632、CHIR-99021
血管BMP-4、EGF、FGF2、VEGF121、VEGF145、VEGF164、VEGF165、VEGF183、Wnt-3aY-27632、CHIR-99021
胰腺EGFFGF10NogginRSPO1Wnt-3aA83-01、Y-27632、CHIR-99021
肾脏BMP-2、BMP-4、FGF-2、FGF-4、FGF-7、FGF-9、HGFY-27632、CHIR-99021、Dorsomorphin
乳腺EGF、FGF-2、FGF-7、FGF-10、Noggin、NRG1-β1、RSPO1、Wnt-3aA83-01、Y-27632、SB-202190
前列腺Activin A、EGF、FGF-2、FGF-10、Noggin、RSPO1A83-01、Y-27632、SB-202190

图2. 正常组织类器官类型与关键因子信息图

  • 肿瘤组织类器官培养方案推荐:
类器官类型相关细胞因子相关小分子
结直肠癌EGF、FGF-2、FGF10NogginRSPO1Wnt3aA83-01、Y-27632、SB-202190
乳腺癌EGFFGF7FGF10NogginRSPO1、Wnt3aA83-01、Y-27632、SB-202190
肝癌EGFFGF10HGFNogginRSPO1、Wnt3aA83-01、Y-27632、SB-202190
胰腺癌Activin A、EGF、FGF-2、FGF-7、FGF10NogginRSPO1、RSPO3、NRG1-β1A83-01、Y-27632、CHIR-99021、SB-202190
肺癌EGF、FGF-2、FGF-4、FGF7FGF10NogginRSPO1A83-01、Y-27632、CHIR-99021、SB-202190
头颈癌EGF、FGF-2、FGF-10、Noggin、RSPO1A83-01、Y-27632、CHIR-99021
胃癌EGFFGF10NogginRSPO1Wnt3aA83-01、Y-27632、CHIR-99021、SB-202190
前列腺癌EGF、FGF-2、FGF-10、Noggin、RSPO1A83-01、Y-27632、SB-202190
卵巢癌EGF、FGF-2、FGF-10、HGF、IGF1、Noggin、NRG1-β1、RSPO1、Wnt3aA83-01、Y-27632、SB-202190
肾癌Activin A、BMP-4、EGF、FGF-2、FGF-9、GDNF、IL-2、Insulin、Noggin、RSPO1Y-27632、CHIR-99021、SB-202190
胆管癌EGF、FGF-10、HGF、Insulin、RSPO1A83-01、Y-27632
膀胱癌EGF、FGF-2、FGF-7、FGF-10、HGF、IL-2、Noggin、RSPO1、Wnt3aA83-01、Y-27632、SB-202190
黑色素瘤EGF、FGF-1、Noggin、RSPO1、Wnt3aA83-01、SB-202190

图3. 肿瘤组织类器官类型与关键因子信息图

三、胃癌类器官培养方法详解

胃癌类器官是研究胃上皮稳态、胃癌发生机制、肿瘤异质性及药物敏感性的重要模型。以文献(PMID: 29703791)为例,简述关键步骤及细胞因子应用。

图4. 胃癌器官培养方法示意图(PMID: 29703791)

组织采集与运输

组织来源:手术切除的胃癌组织及配对的正常胃黏膜(距肿瘤边缘≥5cm);也可使用胃镜活检组织。

运输介质:含有1% 青霉素-链霉素的Advanced DMEM/F12培养基,4℃保存,24小时内完成处理。

组织消化与细胞分离

▶ 将组织剪成 1~3 mm³ 的小块。

▶ 加入胶原酶II型或胶原酶IV型,于37℃震荡消化30~60min,至形成浑浊细胞悬液。

▶ 加入含10% FBS的培养基终止消化。

▶ 通过70μm细胞筛过滤,去除未消化的组织块。

▶ 300×g离心5min,弃上清。如红细胞较多,加入红细胞裂解液处理 2~3min,再用PBS 洗涤一次。

基质胶包埋

▶ 将细胞沉淀与基质胶按1:1~1:3比例混合(全程冰上操作)。

▶ 使用预冷移液器,将混合液滴入预热的24孔板(每滴15~30μL),避免气泡。

▶ 放入37℃培养箱,静置15~20min使基质胶完全凝固。

▶ 每孔加入300~500μL预热的胃癌类器官完全培养基。

▶ 置于37℃、5% CO2培养箱,每2~3天更换一次培养基。

胃癌类器官完全培养基配方

▶ 基础培养基:Advanced DMEM/F12

▶ 添加剂:B-27(1×)、N-2(1×)、GlutaMAX(1×)、HEPES(10mM)、青霉素/链霉素(1×)

▶ 核心细胞因子与小分子(参考文献推荐浓度):

推荐浓度功能
RSPO1500ng/mL激活Wnt通路
Noggin100ng/mL抑制BMP信号,促进扩增
EGF50ng/mL促进上皮细胞增殖
FGF10100ng/mL促进胃祖细胞扩增
HGF25ng/mL促进细胞存活与生长
Wnt3a(可选)100ng/mL启动并长期维持类器官(对正常胃必需)
A83-010.5 μMTGF-β 抑制剂,阻止分化,促进扩增
Y-2763210μMROCK抑制剂,防止失巢凋亡,仅首次传代或复苏后添加24h
Nicotinamide10mM抑制细胞衰老,提高长期扩增能力

【注】正常胃癌类器官必须添加 Wnt-3a;部分胃癌类器官可能对 Wnt-3a 依赖性降低,但起始培养时仍建议添加 100 ng/mL。

培养与传代

▶ 类器官出现时间:通常在3~7天内形成囊状或实心上皮球体。

▶ 首次传代时机:当每滴中出现10~30个类器官或密度达到孔面积的70~80%(约7~14天)。

▶ 传代比例:1:2~1:4,视生长速度而定。

▶ 传代方法:用TrypLE Express或Accutase将类器官解离成小细胞团(10~50μm),重新包埋至新鲜基质胶中

四、MGC™细胞因子验证数据(部分举例)

  1. 高生物活性ED50 

Measured by its ability to induce Topflash reporter activity in CHO cells in the presence of 5ng/mL BMP2 (Cat. No. MGC005).The ED50 for this effect is < 30ng/mL.The activity of Recombinant Human Wnt-3a (Cat. No. MGC090) was higher than other competing products.

  • 生物活性类器官培养

图5. 胃癌类器官培养效果图

所用细胞因子:EGF (MGC015) + FGF-10 (MGC021) + Noggin (MGC067) + RSPO1(MGC078) + Wnt3a (MGC090)

美仑细胞因子家族 · 始终如一的品质承诺

高活性 | 高纯度 | 低内毒素 | 无载体蛋白 | 批间一致性高 | 高性价比

相关产品信息

  • 细胞因子
产品编码产品名称表达系统
及标签
种属内毒素
(EU/μg)
包装规格
MGC001Recombinant Human Activin ACHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC003Recombinant Human Heat Stable bFGFE.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC004Recombinant Human BDNFCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC005Recombinant Human BMP-2E.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC006Recombinant Human BMP-4E.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC009Recombinant Human CNTFE.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC014Recombinant Human DKK-1CHOHuman≤0.0110μg/50μg
MGC015Recombinant Human EGFCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC017Recombinant Human FGF-4E.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC018Recombinant Human FGF-7/KGFCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC019Recombinant Human FGF-8bE.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC020Recombinant Human FGF-9CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC021Recombinant Human FGF-10/KGF2CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC022Recombinant Human FGF-19E.coliHuman≤0.0210μg/50μg/1mg
MGC031Recombinant Human GDNFE.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC032Recombinant Human β-NGFHEK293Human≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC033Recombinant Human HGFCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC034Recombinant Human IFNγCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC038Recombinant Human IL-2CHOHuman≤0.00110μg/50μg/1mg
MGC040Recombinant Human IL-4CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC048Recombinant Human IL-13CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC053Recombinant Human IL-22CHOHuman≤0.0110μg/50μg
MGC058Recombinant Human IGF-1HEK293Human≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC060Recombinant Human LR3 IGF1CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC061Recombinant Human LIFCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC062Recombinant Mouse LIFCHOMouse≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC067Recombinant Human NogginCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC068Recombinant Mouse NogginCHOMouse≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC070Recombinant Human NeurturinCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC071Recombinant Human OSMCHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC072Recombinant Human NRG1-β1E.coliHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC081Recombinant Human TGF-β1CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC087Recombinant Human VEGF121CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC088Recombinant Human VEGF165CHOHuman≤0.0110μg/50μg/1mg
MGC090Recombinant Human Wnt-3a (hFc Tag)CHO,C-FcHuman≤0.110μg/50μg/1mg
  • 小分子
产品编码产品名称CAS包装规格
MC9833Y-27632146986-50-71mg/5mg/10mg/50mg/100mg
MC2046SB 202190152121-30-75mg/10mg/25mg/100mg
MC9830A 83-01909910-43-61mg/5mg/10mg/50mg/100mg
MC9028MK-2206 dihydrochloride1032350-13-25mg/10mg/50mg/100mg
MC9834Dorsomorphin dihydrochloride1219168-18-95mg/10mg/20mg/50mg/100mg
MC9828SB-431542301836-41-95mg/10mg/50mg
MC9582RepSox446859-33-210mg/50mg
MC9606LDN1931891062368-24-410mg/50mg
MB1661烟酰胺/尼克酰胺/维生素B398-92-025g/100g
MB5152DAPT (GSI-IX)208255-80-510mg
MB5959Forskolin(毛喉素;佛司可林)66575-29-910mg
MB1138Dinoprostone363-24-61mg/10mg
MB5682CHIR-99021252917-06-95mg
MB1302维A酸;全反式维A酸;维生素A酸302-79-41g/5g
MB5663Ipatasertib(GDC0068)1001264-89-62mg/10mg
MB1735N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)616-91-125g/100g
MB3700Purmorphamin483367-10-85mg
MB4050IWR-1-endo1127442-82-310mg
MB0258IDE11160927-48-91mg
MB6045LY294002154447-36-610mg/50mg
MB1089维生素K3,甲萘醌58-27-510g/100g
MB4054IWP-2686770-61-610mg/50mg
MB0262IWP-4686772-17-85mg/25mg
  • 其他
产品编码产品名称包装规格
PWL038Advanced DMEM/F-12500mL/500mL×20
PWL043Neural-27添加剂 (50X), 去除维生素 A; 等同于B-2710mL/100mL
MA0659Versene溶液100mL
MA00361M HEPES 溶液(细胞培养级)100mL
PWL079N-2添加剂 (100X)5mL/50mL
PWL031L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液(200mM)100mL
PWL002特级胎牛血清(原代细胞干细胞专用)25mL/100mL/500mL
PWL048Meiluncell®高回收率干细胞专用清洗液200mL
PWL234细胞保存液(无蛋白GMP干细胞专用)20mL/100mL
PWL084ITS+液体培养基补充剂(100×)10mL
PWL062双抗灭菌液,青霉素/链霉素溶液,灭菌100mL
MA0015PBS(1X),细胞培养级500mL/500mL×10
MA0009D-PBS,含钙、镁,(细胞培养级)500mL
MA0155L-谷氨酰胺溶液((100X),200mM100mL
MB3235人转铁蛋白10mg/100mg
MB2665胶原酶II型100mg/1g
MB2711胶原酶IV型100mg/1g
MA0207红细胞裂解液(10X),改良型100mL
PWL064DMSO(细胞培养级)125mL
PWL300Meiluncellgel 基质胶 (标准型)5mL/10mL
PWL301Meiluncellgel 基质胶 (标准型, 无酚红)5mL/10mL
PWL302Meiluncellgel 基质胶 (低生长因子)5mL/10mL
PWL303Meiluncellgel 基质胶 (低生长因子, 无酚红)5mL/10mL
PWL304Meiluncellgel 基质胶 (高浓度)5mL/10mL
PWL305Meiluncellgel 基质胶 (高浓度, 无酚红)5mL/10mL
PWL306Meiluncellgel 基质胶 (高浓度, 低生长因子)5mL/10mL
PWL307Meiluncellgel 基质胶 (干细胞用, 无酚红)5mL/10mL
PWL308Meiluncellgel 基质胶 (类器官用, 无酚红)5mL/10mL
PWL207CellTiter-Meiluncell 3D发光法细胞活力检测试剂盒10mL(>100T)/100mL(>1000T)/500mL(>5000T)
MA0655YO-PRO-1 3D染色液10mL/50mL/200mL
MA0440增强型ATP检测试剂盒200T
MA0220AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒10T/50T/100T/50T×5/100T×5
MA0223一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光)20T/50T
MA0343细胞培养污染检测试剂盒20T

1. 类器官培养细胞因子

类器官作为体外重现组织结构与功能的重要3D模型,其形成、扩增与成熟高度依赖培养体系中细胞因子的精准配比。

美仑生物为您提供涵盖肠道、脑、肝、心脏、血管、肿瘤等十余种类器官培养方案,并附上经典因子组合与关键小分子,助您稳定构建理想模型。全文请点击:选购指南|类器官培养用细胞因子

2. iPSC/ESC培养与分化用细胞因子

诱导多能干细胞(iPSC)和胚胎干细胞(ESC)具有无限增殖和分化为三胚层任一细胞类型的巨大潜力,为疾病模拟、药物筛选和再生医学带来了革命性机遇。

美仑生物的MGC™系列高活性细胞因子专为iPSC/ESC的包被、扩增、多能性维持及定向分化而优化,帮助您从源头把控细胞质量,让每一次实验都稳健可靠。全文请点击:选购指南|iPSC/ESC培养与分化用细胞因子

3. 干细胞定向分化相关细胞因子

成体干细胞(如神经干细胞、间充质干细胞、造血干细胞)的定向分化,为再生医学、疾病建模和药物筛选带来了无限可能。

美仑生物MGC™系列高活性细胞因子,为神经干细胞(NSC)、间充质干细胞(MSC)和造血干细胞(HSC)的维持扩增及定向分化而优化,帮助您精准驾驭干细胞的命运,让每一批分化实验都稳健可靠。全文请点击:选购指南|干细胞定向分化相关细胞因子

4.免疫细胞活化与培养用细胞因子

T细胞、B细胞、NK细胞、树突状细胞(DC)、巨噬细胞等免疫细胞的体外活化、扩增与功能极化,是免疫学基础研究、疫苗开发及细胞治疗的核心环节。

美仑生物MGC™系列高活性细胞因子,专为各类免疫细胞的体外激活、扩增及亚型极化而优化,帮助您从源头掌控细胞质量,让每一次免疫实验都稳健可靠。全文请点击:选购指南|免疫细胞活化与培养用细胞因子

抗生素,是指由微生物(包括细菌、真菌、放线菌属)或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其他活性的一类次级代谢产物,能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质。无论是严防死守细胞培养中的污染,还是精准筛选携带抗性基因的工程菌株,选对抗生素往往决定着实验的成败!然而,面对种类繁多的抗生素,您是否也曾感到迷茫:哪种最适合我的实验?广谱还是窄谱?天然还是合成?别担心!小美今天为大家梳理下抗生素分类与选择攻略,助力大家明明白白选择,稳稳当当实验!

01抗生素分类

了解抗生素的分类,是精准选择的第一步。我们从科研应用角度出发,结合其本质特性,为您梳理以下核心分类方式:

按来源分类:

天然抗生素:直接从微生物培养液中提出或分离出来的物质,如青霉素、链霉素、四环素等;

半合成抗生素:以天然抗生素为母体,通过化学修饰或结构改造增强疗效、降低毒性或扩大抗菌谱,如阿莫西林(青霉素衍生物)、头孢呋辛(头孢菌素改造);

全合成抗生素:完全通过化学合成制备,如磺胺类药物(如磺胺嘧啶)、喹诺酮类(如环丙沙星)。

按抗菌谱分类:

窄谱抗生素:只对特定种类微生物有效,如青霉素、红霉素、甲硝唑等;

广谱抗生素:对多种细菌有效,如四环素类、氟喹诺酮类等。

按化学结构及作用机制分类:

抑制细胞壁合成:通过抑制细胞壁合成酶,抑制肽聚糖合成和连接,从而破坏细菌细胞壁结构,抑制其生长。代表抗生素如β-内酰胺类、糖肽类;

破坏细胞膜功能:对于革兰氏阴性菌,抗生素通过与膜上磷脂或麦角固醇等物质结合,使膜通透性改变,导致膜功能受损,蛋白质、氨基酸、核苷酸等外漏,从而使细菌/死亡;对于革兰氏阳性菌,抗生素以离子载体的形式改变膜的通透性,从而起到抗菌作用。代表抗生素如多粘菌素类;

干扰蛋白质合成:通过影响蛋白质合成的起始阶段、肽链延伸或合成终止阶段中的一个或几个过程,抑制细菌蛋白质的合成。代表抗生素如氨基糖苷类、大环内酯类;

抑制核酸合成:细菌在复制过程需要合成大量的核酸和叶酸,抗生素通过阻断核酸和叶酸的合成,从而抑制细菌复制,起到抗菌作用。代表抗生素如喹诺酮类、利福平。

按作用目标分类:

抗细菌抗生素:科研中最常用!用于防治细菌污染或构建/筛选细菌工程菌株;

抗真菌抗生素:如两性霉素B、制霉菌素;

抗肿瘤抗生素:如放线菌素D、阿霉素;

抗病毒抗生素:种类相对较少,在病毒学基础研究中可能涉及;

其他:污染防控、抗性筛选、兽用、农用抗生素。

02科研场景下的抗生素选择策略:

按作用目标分类:

核心目标:预防细菌和真菌污染,保障细胞健康生长,不影响细胞自身状态。

选择原则:低细胞毒性、有效抗菌谱、稳定性好。

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基因工程抗性筛选

核心目标:根据载体或基因编辑系统携带的抗性基因,严格筛选出成功转化的细胞或微生物(细菌、酵母、真菌、植物、动物细胞)。

选择原则:必须匹配抗性基因、筛选浓度需优化、考虑作用机制与细胞类型耐受性。

(1)原核表达筛选常用抗生素

相关产品信息:

(2)真核表达筛选常用抗生素

相关产品信息:

(3)菌株抗性筛选常用抗生素

相关产品信息:

植物培养用抗生素

核心目标:①用于去除或者抑制微生物生长,如青霉素、氯霉素、利福平等;筛选:筛选转基因植物细胞/组织(携带抗性基因)。

选择原则:对植物细胞毒性低、热稳定性好(常需高压灭菌)、成本效益高、广谱或针对常见植物病原菌。

相关产品信息:

注:①+ + =对大多数微生物有效,+ =对某些微生物有效;由于不同种类的植物对抗生素的毒性敏感性存在很大差异,表中所示的植物毒性浓度可能会更高或更低。因此在使用之前,应该对样本相对于抗生素的敏感性进行预实验,确定药物使用最佳浓度和最佳作用时间,然后开展正式的实验。

兽用抗生素

核心目标:①在实验动物模型中预防或治疗由特定病原体引起的感染性疾病;造模辅助(如诱导肠道菌群失调模型)。

相关产品信息:

03结语

希望这份基于科学分类的指南,能帮助大家拨开迷雾,更加自信、精准地为您的实验选择最匹配的抗生素。记住,了解分类是基础,明确需求是关键,细心操作是保障!

美仑生物可以提供多种常用科研级抗生素(如青霉素-链霉素溶液、G418、潮霉素、嘌呤霉素、四环素等),严格质控,批次稳定,助您实验无忧!

Western Blot的成功的最后一步取决于能否将蛋白信号高效、特异性地转化为检测信号。显影是构筑这一检测体系的核心环节,其产品选择直接决定了最终结果的灵敏度与信噪比

ECL发光液选购表

产品编码MA0186MA0187
产品名称Meilunbio®飞克特超敏ECL发光液Meilunbio®低飞克极超敏ECL发光液
包装规格10mL/100mL/500mL/100mL×1010mL/100mL/500mL
灵敏度飞克级(fg级)低飞克级(低fg级)
抗体稀释倍数一抗1:1,000~50,000 (0.02~1.0μg/mL)1:100,000 (0.01μg/mL)
抗体稀释倍数二抗1:200,000 (0.005μg/mL)1:500,000(0.002μg/mL)
信号持久度☆☆☆☆☆☆☆☆☆
适用场景常规低丰度蛋白检测极低丰度或痕量蛋白检测

【注】:抗体母液浓度均按照1mg/mL计算

  • 我司特超敏ECL发光液(美仑货号:MA0186)灵敏度是飞克级,已能满足客户的大部分实验需求,可优先选此产品。
  • 对于目的蛋白表达量极低的(即用MA0186可能会条带较浅),建议客户选用灵敏度高一级的极超敏ECL发光液(美仑货号:MA0187

显色试剂选购表

产品编码MA0197MB0307MB3188MB9885MB6031
产品名称BCIP/NBT
碱性磷酸酶显色试剂盒
AECPNPPDABTMB
包装规格100mL5g1g/5g1g1g
底物碱性磷酸酶( AP)辣根过氧化物酶(HRP)
适用WB、IHCIHCELISAWB、IHCELISA
产物颜色蓝紫色红色黄色棕褐色蓝色

膜再生液选购表

产品编码MA0181MA0188MA0189
产品名称蛋白印迹膜再生液(酸性)蛋白印迹膜再生液(弱碱性)蛋白印迹膜再生液(强碱性)
包装规格100mL/500mL100mL/500mL100mL/500mL
pH酸性弱碱性强碱性
对于膜上蛋白的保留效果
对于一抗二抗的去除效果
去除一抗二抗所需时间30~60min10~20min20~50min
适用膜的类型PVDF、NCPVDF、NC,PVDF膜上效果更佳PVDF、NC,NC膜上效果更佳
腐蚀性
重复使用次数3-5次3-5次3-5次

【注】膜再生液选择维度:

  • 效果优化:特定抗原抗体难定“最佳”膜再生液;效果欠佳时,可延长孵育时间(确保温度≥20℃,温度过低影响效果),或尝试其他去除液以找到适配实验条件的方案。

Meilunbio始终致力于提供全面、高效、稳定的解决方案,愿成为您科研道路上可靠的伙伴!

Western Blot的成功,不仅依赖于精准的蛋白分离,更取决于能否将蛋白信号高效、特异性地转化为检测信号。转膜、封闭及抗体孵育是构筑这一检测体系的核心环节,其产品选择直接决定了最终结果的灵敏度与信噪比

转膜液选购表

产品编码MB9905MB9906MA0093MA0094MA0121
产品名称Western半干法转膜液
(粉剂,1X)
Western湿转转膜液
(粉剂,1X)
蛋白转移缓冲液
(10x)不含SDS
蛋白转移缓冲液
(10x)含SDS
Meilunbio® Western快速转膜液(10X)
包装规格1L1L500mL500mL100mL/500mL
提供形式粉末粉末液体液体液体
是否含SDS××
1×转膜液配制加入20%乙醇溶液溶解20%甲醇溶液稀释至1×20%乙醇溶液稀释至1×
适用范围半干法转膜湿转法转膜湿转法转膜或半干法转膜湿转法转膜或者半干法转膜
优点粉末形式稳定,易于储存和运输;成本较低液体浓缩液,易于储存可用于变性电泳缓冲液;能在15~35 min内快速完成转膜,无需额外冰水浴
缺点需要溶解,转膜速度较慢不适用于把蛋白质转移到尼龙膜上,转膜速度较慢单位成本相对较高

确定了合适的转膜液后,Meilunbio还提供丽春红染色液(1X,即用型,货号:MA0063)可对转膜效果进行快速验证。丽春红对蛋白染色可逆,不影响后续抗体孵育。

封闭液选购表

产品编码产品名称包装规格优点主要用途
MA0406无蛋白快速封闭液500mL无蛋白成分,干扰少,背景低,封闭仅需10minWB
MA0097Western Blot脱脂奶粉封闭液(1 x in TBST)400mL质量稳定,性价比高WB
MA0100Western Blot 牛血清白蛋白封闭液(1 x in PBST)400mLWB
MB4509封闭兔血清(原液)10mL经脂质萃取和透析后储存于缓冲液,降低染色背景和假阳性IHC、IF
MB4510封闭绵羊血清(原液)10mLIHC、IF
MB4516封闭用驴血清(原液)10mLIHC、IF

另外,Meilunbio同时还提供BSA纯品(牛血清白蛋白(BSA);牛血清白蛋白组分五, 货号:MB4219)供客户以自身实验需求配制。

抗体稀释液选购表

产品编码MB9881MB9888MB9867
产品名称Western一抗稀释液Western二抗稀释液抗体稀释液(普通型)
包装规格100mL/500mL100mL/500mL100mL/500mL
主要用途稀释一抗专用稀释二抗专用稀释一抗、二抗通用
稀释抗体保存温度2~8℃
稀释抗体保存时间6个月1~2周,反复使用3~5次短期保存

【注】为最大化抗体利用率,多次使用的抗体原液或工作液建议添加专用的蛋白抗体防腐剂,如下表:

产品编码产品名称包装规格推荐浓度主要用途
MA1608蛋白抗体防腐剂稳定剂50mL/200mL0.03~0.05%抗体防腐稳定,广谱抗菌抑菌
MA0400改良型蛋白抗体防腐剂稳定剂10mL

洗膜缓冲液选购表

产品编码产品名称Tween-20含量包装规格
MA0102PBST缓冲液
(1X,pH7.4,含0.05%Tween-20)
0.05%3L
MA0101PBST缓冲液
(10X,pH7.4,含0.5%Tween-20)
0.5%500mL
MA0095PBST缓冲液(10X,pH7.4)1%400mL/1L
MA0091TBST缓冲液(10X,pH 7.5)0.5%500mL/5L
MA014120xTBS浓缩液/500mL
MA0016PBS(10X),细胞培养级/500mL
MA0020PBS(20X),细胞培养级/500mL/500mLx20

Meilunbio始终致力于提供全面、高效、稳定的解决方案,愿成为您科研道路上可靠的伙伴!

蛋白样品制备就绪后,蛋白电泳是决定Western Blot成败的核心环节。精准的分离是准确鉴定的前提。选择可靠的电泳产品,确保蛋白根据分子量被清晰区分,将为后续转膜与检测奠定坚实基础。本篇将指导如何为上样、分离与鉴定关键步骤选择最佳工具。

  • 蛋白上样缓冲液选购表
产品编码产品名称示踪染料颜色变性剂/还原剂特点适用
MA00035×蛋白上样缓冲液蓝色SDS、β-巯基乙醇标准配方,含β-巯基乙醇用于常规的SDS-PAGE蛋白样品上样
MA0003-D5×蛋白上样缓冲液(含DTT)SDS、DTT标准配方,含DTT
MA0479速融型SDS-PAGE蛋白上样缓冲液
(5×,含DTT)
SDS、DTT快速融化
不粘稠
MA0480速融型SDS-PAGE蛋白上样缓冲液
(5×,无气味)
SDS、新型无味还原剂快速融化
不粘稠
无气味
MA0481双色速融型SDS-PAGE蛋白上样缓冲液
(5×,含DTT)
蓝色+红色SDS、DTT快速融化
不粘稠方便示踪
用于常规的SDS-PAGE蛋白样品的上样;用于转膜后的泳道示踪
MA0482双色速融型SDS-PAGE蛋白上样缓冲液
(5×,无气味)
SDS、新型无味还原剂快速融化
不粘稠
方便示踪无气味
MA04724×Native PAGE蛋白上样缓冲液红色/无还原剂和变性剂用于Blue/Clear Native PAGE非电泳非变性蛋白上样

  • 蛋白Marker选购表
产品编码产品名称分子量是否预染条带数量条带分子量(kD)规格图例
MA0342预染彩虹蛋白marker
 (10-190KD)
10~190kD1010、17、23(绿色)、32、42、54、65(橙色)、95、140、19025μL(5T)
250μL(50T)
250μL(50T)×10
 
MA0354双色预染彩虹蛋白marker
(12-170KD)
12~170kD1012、17(橙色)、26、38、52、62(橙色)、78、90、135、17025μL(5T)
250μL(50T)
250μL(50T)×10
MA26616预染蛋白分子量标准marker
(10-180KD)
10~180kD1010(绿色)、17、26、31、41、52、65(橙色)、95、130、18025μL(5T)
250μL(50T)
250μL(50T)×10
 
MA26619预染蛋白分子量标准marker(10-250KD)10~250kD910(绿色)、17、27(橙色)、33、52、65(橙色)、95、130、25025μL(5T);
250μL(50T)×2;
250μL(50T)×10
MB9870预染彩虹蛋白marker(40-300KD)40~300kD840、50(绿色)、70(橙色)、100、130、180、250、300(橙色)125μL 
MA0352非变性蛋白marker 45~880kD45~880kD645、66、300、360、440、880100μL(20T) 
MA0353非变性蛋白marker 45~669kD45~669kD645、66、300、360、440、669100μL(20T)

  • 蛋白PAGE凝胶制备试剂盒选购表
产品编码产品名称适配体系组分浓度制胶速度优点缺点
MA0380~MA0384PAGE凝胶超快速制备试剂盒Tris-Gly浓缩胶溶液(2×)
浓缩胶缓冲液(2×)
分离胶溶液(2×)
分离胶缓冲液(2×)
改良型过硫酸铵溶液
一次性配胶杯
6%-MA0380
8%-MA0381
10%-MA0382
12.5%-MA0383
15%-MA0384
☆☆☆☆操作方便,凝胶速度快,无TEMED气味,稳定,适用于变性和非变性电泳一种试剂盒对应一种配胶浓
MA0385~MA0389免封闭PAGE凝胶超快速制备试剂盒浓缩胶溶液(2×)
浓缩胶缓冲液(2×)
分离胶溶液(2×)
分离胶缓冲液(2×)
改良型过硫酸铵溶液
一次性配胶杯
6%-MA0385
8%-MA0386
10%-MA0387
12.5%-MA0388
15%-MA0389
☆☆☆☆☆
MA0159SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒30%Acr-Bis(29:1)
TEMED
4×分离胶缓冲液
4×浓缩胶缓冲液
过硫酸铵(APS)
/☆☆经典配方,包含SDS-PAGE电泳的所有组分配制步骤较多,存在TEMED气味
MA0172Native-PAGE非变性凝胶快速制备试剂盒30%Acr-Bis(29:1)
TEMED
4×分离胶缓冲液
4×浓缩胶缓冲液
过硫酸铵(APS)
/☆☆经典配方,包含Native-PAGE电泳的所有组分

  • PAGE蛋白预制胶选购表
产品名称适配体系组分浓度和产品编号优点缺点
MeilunGel蛋白预制胶,Bis-tris,1.0mm, 10孔Bis-Tris10孔现成凝胶8%-MA0444
10%-MA0445
12%-MA0446
4~12%-MA0465
4~20%-MA0449
极大缩减了配胶时间,即开即用凝胶浓度固定;成本通常高于自配胶;搭配专用缓冲液(MA0464)
MeilunGel蛋白预制胶,Bis-tris,1.0mm, 12孔Bis-Tris12孔现成凝胶8%-MA0450
10%-MA0451
12%-MA0452
4~12%-MA0466
4~20%-MA0455
MeilunGel蛋白预制胶,Bis-tris,1.0mm, 15孔Bis-Tris15孔现成凝胶8%-MA0456
10%-MA0457
12%-MA0458
4~12%-MA0463
4~20%-MA0461
Blue/Clear非变性凝胶电泳试剂盒(3-12%预制胶)Bis-Tris3-12% Native BN/CN预制胶(12孔)
10×电泳缓冲液粉末
4×蛋白上样缓冲液
0.4% G-250染料(电泳用)
5% G-250 染料(上样用)   
3-12%-MA0469包含BN/CN PAGE电泳的所有组分,极大缩减了电泳准备时间凝胶浓度固定,无法灵活调整;成本通常高于自配胶
Blue/Clear 非变性凝胶电泳试剂盒(4-16%预制胶)Bis-Tris4-16% Native BN/CN预制胶(12孔)
10×电泳缓冲液粉末
4×蛋白上样缓冲液
0.4% G-250染料(电泳用)
5% G-250 染料(上样用)      
4-16%-MA0470

  • 蛋白染色液选购表
产品编码MA0399MB4685MB4686
产品名称Meilunbio超快速凝胶蛋白染色液考马斯亮蓝R250考马斯亮蓝G250
原理通过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的静电结合作用以及范德华力,考马斯亮蓝与蛋白质形成强但非共价键连接的复合物。蛋白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子(如磺酸基),从而产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色
应用变性或非变性蛋白电泳的凝胶染色电泳蛋白染色蛋白质含量测定
优点不含甲醇或乙酸,没有难闻气味;无需加热和脱色,5min即可显色质量约100ng的蛋白质,30min可检测10ng BSA蛋白条带染色灵敏度比氨基黑高5倍,可达0.1µg蛋白条带快速显色,且背景颜色很浅不需要做褪色处理。操作快速、方便
缺点成本相对较高染色后需要脱色(有机试剂),才能进行蛋白条带的观察染色后需要脱色(有机试剂);灵敏度低,检测下限为0.5µg

  • 蛋白电泳其他产品选购表
产品编码产品名称包装规格适用体系用途
MA001210X蛋白电泳缓冲液;SDS-PAGE电泳液(Tris-Gly, 10X)500mLTris-GlySDS-PAGE电泳缓冲液
MA0442MeilunGel SDS-PAGE Tris-Gly电泳液即用粉末(2L)1PACK
MA0443MeilunGel SDS-PAGE Tris-Gly电泳液(10×)200mL/500mL
MA0468快速高分辨率电泳缓冲液(10×);适用于tris-gly体系500mL
MA0464Bis-tris MOPS蛋白电泳缓冲液即用粉末(1L)1PACKBis-Tris
MA0467Bis-tris MOPS蛋白电泳缓冲液(20X)100mL/500mL
MA047110× Native PAGE电泳缓冲液粉末500ML(10X)Bis-TrisBN/CN Native-PAGE电泳缓冲液
MA01761M Tris缓冲液pH6.8灭菌500mLTris-Gly单独的配胶试剂
MA017710mM Tris缓冲液 pH8.5灭菌500mL
MA00431M Tris-HCl缓冲液pH7.5灭菌装500mL
MA00491.5M Tris-HCL缓冲液pH8.8,灭菌250mL
MA0053Tris-HCl/SDS分离胶缓冲液(1.5 mol/L), pH8.8500mL
MA0054Tris-HCl/SDS浓缩胶缓冲液(0.5 mol/L), pH 6.8500mL
MA0057Tris-HCl/SDS浓缩胶缓冲液(1mol/L),pH6.8500mL
MA007130%Acr/Bis(29:1)制胶液500mL/500mL×12

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一次精准的蛋白定量,是WB实验成功的关键一步,选择一款匹配实验需求的定量试剂盒,意味着后续的电泳、转膜、显影等一系列步骤奠定了坚实的量化基础。Meilunbio提供不同的蛋白定量检测试剂盒,满足不同实验需求。

蛋白定量试剂盒选购表

产品编号MA0079MA0081MA0082MA1610MA1611
产品名称Bradford蛋白浓度测定试剂盒
(去垢剂兼容型)
Bradford法蛋白定量试剂盒BCA蛋白定量/浓度测定试剂盒即用型BCA快速蛋白定量试剂盒
(0.02~2mg/mL)
即用型BCA快速蛋白定量试剂盒
(0.02~10mg/mL)
检测方法比色法比色法比色法比色法比色法
复合物颜色蓝紫色蓝紫色蓝紫色橙金色橙金色
检测范围0.1~0.5mg/mL0.1~0.5mg/mL0.02~10mg/mL0.02~2mg/mL0.02~10mg/mL
检测下限50µg/ml50µg/ml20µg/ml20µg/mL20µg/mL
待测样品体积10µL10µL20µL20µL10µL
检测时间5min5min20-30min5min5min
孵育温度室温室温37ºC室温室温
EDTA兼容性≤100mM≤100mM≤10mM≤10mM≤10mM
还原剂兼容性DTT≤5mM
β-巯基乙醇≤1M
DTT≤5 mM
β-巯基乙醇≤1M
DTT≤1mM
β-巯基乙醇≤0.01%
不兼容不兼容
去垢剂兼容性Tween 20≤1%
Triton X-100≤1%
SDS≤1%
Tween 20≤0.015%
Triton X-100≤0.05%
SDS≤0.01%
Tween 20≤5%
Triton X-100≤5%
SDS≤5%
Tween 20≤5%
Triton X-100≤5%
SDS≤5%
Tween 20≤5%
Triton X-100≤5%
SDS≤5%

【注】用RIPA裂解液裂(美仑货号:MA0151/MA0152/MA0153)解得到的蛋白样品,由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定其蛋白浓度。可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒(美仑货号:MA0082)或即用型BCA快速蛋白定量试剂盒(美仑货号:MA1610/MA1611)测定其蛋白浓度。

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